Thermo Scientific™ Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit

Detta kit möjliggör syntes av långa cDNA upp till 20 kb vid förhöjda temperaturer (upp till 65 °C), vilket överträffar andra systems förmåga att producera fulllängds cDNA. På grund av ökade synteshastigheter kan reaktionen slutföras på 30 minuter.

För omvänd transkription använder Maxima kitet H minus reverse Transcriptase (RT), som är ett avancerat enzym härlett genom in vitro-evolution av MMLV RT.

Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit med dsDNase erbjuder ett dramatiskt förenklat arbetsflöde som kombinerar genomisk DNA-eliminering och cDNA-syntes i en enrörsprocedur. Kitet innehåller en ny dubbelsträngsspecifik DNas (dsDNase) som är konstruerad för att ta bort kontaminerande genomiskt DNA från RNA-preps på två minuter utan skada på kvalitet eller kvantitet av RNA. Mycket specifik dsDNas-aktivitet mot dubbelsträngat DNA säkerställer att enkelsträngat DNA (såsom cDNA och primers) inte klyvers, och dsDNas-behandlat RNA kan direkt tillsättas till omvänd transkription.

Funktioner i Maxima H minus First Strand cDNA Synthesis Kit inkluderar:

• Ökade reaktionstemperaturer—kan den första strängen av cDNA syntetiseras inom temperaturområdet 42 ––65 °C
• Höga utbyten av fulllängds första strängens cDNA—med RNA-mallar upp till 20 kb
• Flexibel priming—oligo(dT)₁₈, slumpmässiga hexamer eller genspecifika primers
• Integrerat genomiskt DNA-borttagningssteg med dsDNase-kit

Användningsområden

• Fulllängds cDNA-syntes för långa transkript och ORF:er
• Omvänd transkription vid förhöjda temperaturer för att minska effekterna av sekundär struktur
• cDNA-kloning och konstruktionsgenerering
• RNA-seq & enkelcell RNA-seq bibliotekförberedelse
• Isoform- och transkriptkaraktärisering
• Mallväxlingsbaserad fulllängds RNA-seq

Ytterligare information om reaktionskomponenter

• Maxima H minus enzymblandning innehåller Maxima H minus revers Transcriptase och RiboLock RNase-hämmare. RiboLock RNase-hämmare skyddar effektivt RNA-mallar från nedbrytning av RNaserna A, B och C vid temperaturer upp till 55 °C.
• Oligo(dT)₁₈ och slumpmässiga hexamerprimers följer med kitet. Slumpmässiga hexamerprimers binder icke-specifikt och används för att syntetisera cDNA från alla RNA i en total RNA-population. Oligo(dT)18-primern glödgde selektivt till 3'-änden av poly(A)-RNA och syntetiserar cDNA endast från poly(A)-svansat mRNA. Genspecifika primers kan också användas med kitet för att prima syntes från en specificerad sekvens.
• 10 mM dNTP Mix är en förblandad vattenlösning av dATP, dTTP, dCTP och dGTP.
• Nukleasfritt vatten tillhandahålls för reaktionsuppbyggnad och utspädning av prov-DNA. Avsaknaden av endo-, exodeoxyribonuklaser, ribonuklaser och fosfataser har bekräftats genom lämpliga kvalitetstester.