Invitrogen™ ATP Bestämningskit

Funktioner av ATP Bestämningskit inkluderar:

• Använder ett luminescensbaserat system för att övervaka ljusemission, vilket möjliggör känslig och exakt kvantifiering av ATP nivåer
• Erbjuder exceptionell känslighet, kan detektera så lite som 0,1 picomole av redan existerande ATP eller ATP genereras i kinetiska system
• Använder en unik formulering där luciferas- och luciferinkomponenterna är förpackade separat, vilket gör det möjligt för forskare att optimera analysförhållandena för sina specifika prover och instrument
• Inkluderar en generös mängd reagens, tillräckligt för att utföra 200 ATP analyser med 500μ L provvolymer eller 1 000 ATP analyser med 100μ L provvolymer (tillräckligt för tio 96-brunnars plattanalyser)
• Underlättar kvantitativ analys av ATP nivåer i ett brett spektrum av biologiska och miljömässiga prover och experimentella system
• Utnyttjar den mycket specifika och känsliga bioluminescensreaktionen mellan luciferin och luciferas i närvaro av ATP , vilket ger en pålitlig och reproducerbar metod för ATP kvantifiering
• Kompatibel med olika luminometrar och mikroplattläsare med luminescensläge, vilket gör det till ett mångsidigt verktyg för ATP upptäckt i olika forskningsmiljöer

Principen för den ATP-beroende bioluminiscerande reaktionen

De ATP Determination Kit är baserat på det absoluta kravet på luciferas för ATP att producera ljus. I närvaro av Mg ²⁺ katalyserar luciferasenzymet reaktionen av luciferin, ATP och _O2 för att bilda oxyluciferin, AMP, _CO2 , pyrofosfat och ljus med en emission av ungefär 560 nm vid pH 7,8. Den självlysande signalen som genereras är direkt proportionell mot mängden ATP , vilket möjliggör mätning av ATP nivåer.

Mäta ATP nivåer i lösning eller cellysat

Analysreagensen i ATP Determination Kit är inte permeabelt för levande och intakta celler, vilket gör denna analys lämplig för mätning av extracellulär ATP eller ATP från prover i lösning. För att mäta intracellulärt ATP nivåer för cellhälso- eller livsduglighetsanalyser, krävs cellys för att frigöras ATP från cellerna. Lyseringsbuffertalternativ som är kompatibla med luciferas-luciferinreaktionen inkluderar Pierce Luciferase Cell Lysis Buffer (2X) (kat.nr. 16189) och 20X celllysbuffertformuleringen som listas nedan. 20X bufferten ska spädas 1:20 med vatten och användas omedelbart för cellys innan luciferaset körs ATP analysera.

20X lyseringsbuffert:

• 200 mM Tris (pH 7,5)
• 2 M NaCl
• 20 mM EDTA
• 0,2 % Triton X-100

Omfattande och mångsidig ATP analyskit

ATP är en kritisk molekyl som finns i alla levande celler och är energikällan för olika biologiska processer, inklusive muskelkontraktion, nervimpulsutbredning och biokemisk syntes. ATP Nivåer mäts ofta för att bestämma cellulär viabilitet och metabolism, bedöma mitokondriers funktion och aktivitet eller upptäcka bakteriell och mikrobiell kontaminering. Denna luciferasbaserad ATP detektionskit ger en mångsidig och känslig metod för mätning ATP produktion i olika enzymatiska reaktioner, inklusive ATPas och NADPH-oxidas, och övervakning ATP frisättning från celler.

Luciferin –luciferas luminescensanalysen kan användas för att detektera lågnivå bakteriell kontaminering i biologiska prover som blod, mjölk och urin, tillsammans med miljöprover för testning av vatten, jord och slam. ATP Detektion har också använts för att studera effekterna av antibiotika på bakteriepopulationer, bestämma cellproliferation och cytotoxicitet i både bakteriella och däggdjursceller, och särskilja cytostatisk kontra cytocidal potential hos anticancerläkemedel på maligna celltillväxt.