Invitrogen™ Calcein AM, cellgenomsläppliga gröna och blå färgämnen

Cellvitalitet mätt med intracellulär esterasaktivitet är en erkänd parameter för cellhälsa. Levande celler kännetecknas av närvaron av allestädes närvarande intracellulär esterasaktivitet, bestämd av den enzymatiska omvandlingen av det praktiskt taget icke-fluorescerande cellpermeant Calcein AM till det intensivt fluorescerande Calcein Green (ex/em 494/517 nm) eller Calcein Blue (ex/em 360/449). Apoptotiska och döda celler med skadade membran behåller inte kalcein.

Acetoximetyl (AM) esterderivaten av fluorescerande indikatorer utgör en av de mest användbara grupperna av föreningar för studier av levande celler. Väl inne i cellen spjälkas de lipofila blockerande grupperna av ospecifika esteraser, vilket resulterar i en laddad form som behålls i cellerna i mycket större utsträckning än dess moderförening.

Förutom cellviabilitetsanalyser används Calcein AM också för att studera cellmigration, cellvidhäftning och cellulära upptagningsprocesser. Dess fluorescensegenskaper gör den till ett mångsidigt verktyg för olika tillämpningar inom cellbiologisk forskning.

Applicering av det icke-AM Calcein cellogenomträngliga färgämnet:

Calcein, AM kräver esterasklyvning av acetoximetyl(AM)-estern för att bli fluorescerande. Liposomer har inga esteraser om de inte är specifikt konstruerade för att inkludera enzymet. Den vattenlösliga, icke-AM-formen av Calcein (kat. nr. C481), kräver inte esterasklyvning för att vara fluorescerande.

Denna mångsidiga gröna fluorofor är cellogenomtränglig och används ofta för cellspårning och i studier av endocytos och gap junctions.

Funktioner hos Calcein AM cellgenomsläppligt färgämne:

• Cellpermeant Calcein —AM är cellpermeant, vilket betyder att det kan passera genom cellmembranet och komma in i levande celler. Denna egenskap tillåter forskare att märka och visualisera intracellulära strukturer och processer.
• Ej giftigt —Calcein AM är ogiftigt för celler och påverkar inte nämnvärt cellfunktion eller metabolism.
• Esterasklyvning —Väl inne i cellen spjälkas acetoximetyl(AM)-estergruppen i Calcein AM av intracellulära esteraser, vilket resulterar i bildandet av Calcein. Denna klyvningsprocess aktiverar fluorescensen av Calcein, vilket möjliggör enkel upptäckt och visualisering.
• Enhetlig fördelning —Vid inträde i levande celler fördelar Calcein AM sig jämnt över hela cytoplasman och kärnan. Denna jämna fördelning möjliggör noggrann bedömning och visualisering av cellulära processer.
• Stabilitet —Calcein AM är relativt stabilt i celler och kan användas för långvariga avbildningsexperiment utan betydande fotoblekning.
• Fluorogent —Calcein AM är en icke-fluorescerande förening, men när den väl är inne i cellen spjälkas den av intracellulära esteraser, vilket resulterar i bildandet av fluorescerande kalcein.
• Ljus och stabil fluorescens —Calcein uppvisar ljusgrön eller blå fluorescens när det binder till intracellulära fria kalciumjoner eller andra mål. Den resulterande fluorescensen är stabil, vilket möjliggör långtidsavbildning och analys.

Applicering av det cellgenomträngande färgämnet Calcein AM:

Calcein AM kan användas i olika tillämpningar, inklusive cellviabilitetsanalyser, cellmigrerings- och invasionsstudier, intracellulär kalciumavbildning, cellmärkning och spårning samt fluorescensmikroskopi och flödescytometri.

• Cellviabilitet —Calcein AM används ofta för att bedöma cellviabilitet och cytotoxicitet. Levande celler med intakta cellmembran kan ta upp Calcein AM, som sedan klyvs av intracellulära esteraser för att producera fluorescerande Calcein. Fluorescensintensiteten för Calcein kan mätas för att bestämma cellviabilitet.
• Cellmigrering —Calcein AM kan användas för att spåra och visualisera cellmigrering. Genom att märka celler med Calcein AM kan deras rörelse och migration övervakas över tid med hjälp av fluorescensmikroskopi. Detta är särskilt användbart för att studera processer som sårläkning, metastaser och cellhandel.
• Cellvidhäftning —Calcein AM kan användas för att studera cellvidhäftning och cell-substrat interaktioner. Genom att märka celler med Calcein AM och odla dem på olika substrat kan cellernas vidhäftningsegenskaper bedömas. Förändringar i fluorescensintensitet kan indikera skillnader i cellvidhäftning.
• Cellulärt upptag —Calcein AM kan användas för att undersöka cellulära upptagsprocesser. Genom att märka molekyler eller nanopartiklar med Calcein AM kan deras upptag av celler spåras och analyseras. Detta är värdefullt för att studera läkemedelsleveransmekanismer och förstå cellulära upptagsvägar.
• Intracellulära pH-mätningar —Calcein AM har använts som ett pH-känsligt färgämne för att mäta förändringar i intracellulärt pH. Fluorescensegenskaperna hos Calcein kan moduleras av pH, vilket gör att forskare kan övervaka pH-förändringar i celler.