Invitrogen™ CellTracker™ Fluorescent Probes

Funktionerna hos CellTracker-färgämnen inkluderar:

• Lätt att använda—ta bort odlingsmedia, tillsätt färgämne, inkubera 15-45 minuter och avbilda celler
• Utmärkt retention—fluorescerande signalretention i>72 timmar (vanligtvis tre till sex generationer)
• Idealiska spårningsfärgämnen—övervakar cellrörelser, plats, proliferation, migration, kemotaxi och invasion
• Låg cytotoxicitet—påverkar inte livsduglighet eller proliferation
• Cellmångsidighet– arbetar med celler i suspension och vidhäftande celler

CellTracker fluorescerande sonder har utformats för att fritt passera genom cellmembran; men när de väl är inne i cellen omvandlas de till cellimpermeanta reaktionsprodukter. CellTracker-fluorescenssonderna (förutom CellTracker Deep Red) innehåller en klormetyl- eller brommetylgrupp som reagerar med tiolgrupper med hjälp av en glutation S-transferas-–medierad reaktion. I de flesta celler är glutationnivåerna höga (upp till 10 mM) och glutationtransferas är allestädes närvarande. CellTracker Deep Red-sonden innehåller en succinimidylesterreaktiv grupp, som reagerar med amingrupper som finns på proteiner.

Efter konvertering till impermeanta versioner, hålls CellTracker fluorescerande sonder väl kvar i levande celler genom flera generationer. Sonderna överförs till dotterceller, men överförs inte till intilliggande celler i en population. Celler laddade med CellTracker fluorescerande sonder uppvisar fluorescens i minst 72 timmar och uppvisar idealiska spårfärgningsegenskaper,—de är stabila, giftfria vid arbetskoncentrationer, väl kvarhållna i celler och ljust fluorescerande vid fysiologiskt pH. Dessutom finns flera CellTracker fluorescerande sonder med olika excitaterings- och emissionsspektra tillgängliga, vilket möjliggör multiplexering vid fluorescensavbildning. CellTracker-färgämnena bibehålls med fixering och permeabilisering, vilket möjliggör användning med antikroppar för fluorescensimmunfärgningstillämpningar.

Spektrala egenskaper hos de fluorescerande CellTracker-sonderna:

• CellTracker Blue CMAC—353/466 nm
• CellTracker Blue CMF2HC—371/464 nm
• CellTracker Blue CMHC—372/470 nm
• CellTracker Violet BMQC —415/516 nm
• CellTracker Green CMFDA—492/517 nm
• CellTracker Green BODIPY™—522/529 nm
• CellTracker Orange CMTMR—541/565 nm
• CellTracker Orange CMR—548/576 nm
• CellTracker Red CMTPX—577/602 nm
• CellTracker Deep Red—630/660 nm

Fluorescerande CellTracker-reagens inkluderar de blå-fluorescerande klormetylderivaten av amino-, hydroxi- och difluorhydroxikumarin (CMAC, CMHC och CMF2HC), de grön-fluorescerande klormetylderivaten av fluoresceindiacetat (CMFDA) och ett BODIPY™-färgämne, de orange-fluorescerande CMTMR och CMRA, och den röd-fluorescerande CMTPX. CellTracker Blue CMAC, CMHC och CMF2HC, CellTracker Violet, det violett-fluorescerande brommetylderivatet av kumarin (BMQC), CellTracker Green BODIPY™, CellTracker Orange CMTMR och CellTracker Red CMTPX kräver inte enzymatisk klyvning för att aktivera sin fluorescens, medan den gröna CMFDA och orange CMRA kräver enzymatisk klyvning. De ogenomträngliga reaktionsprodukterna av klormetyl- eller brommetylkumariner har utmärkt retention, stark fluorescens och relativt likformig cytoplasmatisk färgning, vilket gör dessa derivat potentiellt användbara för att korrigera rörelseartefakter vid bilddiagnostik. CMFDA är färglös och icke-fluorescerande tills cytosoliska esteraser klyver bort acetaterna och frigör en ljust fluorescerande produkt.

Förutom ljus fluorescens och utmärkt retention bidrar CellTracker fluorescerande sonder inte till cytotoxicitet.