Invitrogen™ Click-iT™ Nascent RNA Capture Kit, för analys av genuttryck

De Click-iT Nascent RNA Capture Kit, använder patentskyddat Click-iT kemi för att med hög effektivitet och känslighet fånga nypressade RNA. Av Click-iT tillvägagångssätt studier på högupplösningsanalys av genreglering kan utföras tillsammans med RNA-reglering, RNA-stabilitet, RNA-syntes, RNA-sönderfall och -nedbrytning, transkriptionell reglering, delta/delta C(t), nukleär körning på/avrinning med mera. Etylenuridin (EU) ribonukleotidhomologer som innehåller en alkynreaktiv grupp matas till celler eller vävnad. När de väl inkorporerats lyseras cellerna och RNA:t isoleras. En biotinazid är“ klickade på” och sedan används strepavidin magnetiska pärlor för att fånga den nyligen syntetiserade poolen av RNA. De infångade RNA:n amplifieras sedan och de resulterande cDNA:n används på valfritt antal metoder efter infångning. Vi har validerat det för arrayer (både hög och låg densitet), sekvensering på SOLiD™ och antingen SYBR™ eller TaqMan™ baserad qPCR-baserad delta-CT-analys. Så få som 25 000 celler behövs för analys av nyligen inducerade transkript. Satsen tillåter 40 villkor för märkning och infångning som sedan kan delas upp i 400 separata analytiska analyser. Med ett pris på runt dollar per assy är detta perfekt för forskare i akademi och industriella miljöer. EU-reagenset vid den rekommenderade koncentrationen på μ200 M tolereras väl av celler. I en arrayscreen med över 32 000 gener kunde endast de minsta förändringarna i 12 jämfört med en kontrollvehikel detekteras. Vid initial matningskoncentration 5x av vad vi rekommenderar (200 μM vs 1,0 mM) fanns det inga effekter på en panel av hushållningsgener eller på cellernas förmåga att proliferera normalt. Känslighet och tillförlitlighet bekräftades i en array med låg densitet (TLDA™ ) av apoptotiska gener. Den fångade begynnande poolen hittade exakt alla de tidigare karakteriserade apoptotiska (stauroporin-inducerade) transkripten, utan någon detekterbar förändring i sekvensinformation.

• Mindre farligt

Upptäckt inte bara återhämtning. De senaste decennierna Genomiska ansträngningar avslöjade att endast 2% av människan kodar för protein, vilket lämnar 98% av det mänskliga genomet som Unknome. Att upptäcka syftet och uttrycksmönstren för denna enorma reservoar av okänd sekvens kommer att bli markant hjälpt i detta decenniums transkriptomik av detta nya tillvägagångssätt.

Klickkemi, DNA- och RNA-rening och analys, analys och genotypning av genuttryck, märkningskemi, mikroarrayanalys, begynnande RNA-detektion och -infångning med klickkemi, nukleinsyramärkning och Oligo Syntes, RNA-isolering för uttrycksmikroarrayer, RNA-märkning