Invitrogen™ Click-iT™ Plus EdU Cell Proliferation Kit för bildbehandling, Alexa Fluor™ 647 färgämne

Click-iT Plus EdU Cell Proliferation imaging-kit har optimerats för fluorescensmikroskopitillämpningar och är ett överlägset alternativ till traditionella proliferationsanalyser. I denna analys är den modifierade tymidinanalogen EdU (5-etynyl-2'-deoxiuridin, en nukleosidanalog av tymidin) effektivt inkorporerad i nysyntetiserat DNA och fluorescerande märkt med en ljus, fotostabil Alexa Fluor™ färgämne i en snabb, mycket specifik, mild klickreaktion.

Hitta fler verktyg för bildbaserad detektion av prolifererande celler>

• Enkelt —fungerar första gången, varje gång, på kortare tid än traditionella metoder
• Effektiv —inga denatureringssteg eller hård behandling krävs
• Innehållsrika resultat —förbättrade bevarandet av cellmorfologi, antigenstruktur, GFP-fluorescerande signal och DNA-integritet
• Konsekvent —inte beroende av variabla antikroppslots för detektion.

Kitet innehåller alla komponenter som behövs för att märka och detektera den inkorporerade EdU samt utföra cellcykelanalys på prover från vidhäftande celler. För cellcykelanalys innehåller kitet ett blått fluorescerande ljus Hoechst 33342 färgämne. Satsen innehåller tillräckligt med reagens för att märka 50 18x18 täckglas med 500μ 1 reaktionsbuffert per test.

Undvik de hårda behandlingarna i samband med BrdU-metoden
Att mäta förändringar i cellproliferation är en grundläggande metod för att bedöma cellhälsa, bestämma genotoxicitet och utvärdera läkemedel mot cancer. Den mest exakta metoden att göra detta är genom att direkt mäta DNA-syntes. Den traditionella metoden använder nukleosidanalogen BrdU (5-bromo-2'-deoxiuridin, en nukleosidanalog av tymidin), som införlivas i nyligen transkriberat DNA. Efter inkorporering behandlas proverna med hårda metoder (HCl, värme eller enzymer) för att denaturera DNA:t och exponera BrdU-molekylerna för detektion av anti-BrdU-antikroppar. BrdU-metoden för att mäta cellproliferation är dock tidskrävande och svår att utföra konsekvent. De hårda behandlingar som krävs för denna metod kan negativt påverka provets integritet, cellmorfologi, bildkvalitet och förmågan att multiplexa.

De Click-iT™ Plus EdU-analysen mäter hastigheten för ny DNA-syntes baserat på inkorporering av nukleosidanalogen EdU i DNA. Detektion uppnås genom en katalyserad ''klick''-reaktion som vanligtvis slutförs inom 30 minuter. Klickreaktionen använder bioortogonala (biologiskt unika) delar för att fluorescerande märka prolifererande celler, vilket ger låg bakgrund och hög detektionskänslighet. På grund av de milda reaktionsförhållandena Click-iT™ Plus-analyser kan exakt bestämma cellproliferation samtidigt som cellmorfologi, DNA-integritet, antigenbindningsställen och den fluorescerande signalen från GFP bevaras. Bevarande av DNA-integritet möjliggör DNA-färgning, inklusive färgning med färgämnen som används för cellcykelanalys.