Invitrogen™ Click-iT™ TUNEL Alexa Fluor Bildanalyser för mikroskopi& HCS

Apoptos markeras av definierade cellulära processer, inklusive cellavrundning, blebbing och DNA-fragmentering. TUNEL-analysen är den mest använda analytiska metoden för att detektera fragmenterat DNA i apoptotiska celler i vävnadsprover, som börjar med inkorporering av modifierade dUTPs vid 3'-OH-ändarna av fragmenterat DNA. dUTP:erna inkluderar ofta en fluoroformolekyl. På grund av storleken på fluoroforen kan modifierade dUTP:er visa lägre än förväntade inkorporeringshastigheter, vilket negativt påverkar känsligheten hos TUNEL-analysen. Ganska ofta uppvisar fluoroforer som används i för närvarande tillgängliga TUNEL-analyssatser fotoblekning och fluorescerande spektrala överlappningsproblem, som båda minskar känsligheten för och förmågan att multiplexa dessa analyser.

De Click-iT Plus TUNEL-analysen utvecklades för att lösa dessa problem och är baserad på en koppar(I)-katalyserad (dvs klick) reaktion mellan en azid och alkyn. Den lilla storleken på Alexa Fluor azid, som har en molekylvikt på cirka 1 kDa, möjliggör enklare inkorporering av Alexa Fluor 488, 594 eller 647 färgämne till komplexa prover, jämfört med större (MW∼ 100 000 Da) antikroppar. Detta tillåter mild fixering eller permeabilisering och snabbare analysomloppstid (cirka två timmar) och möjliggör detektering av en högre andel apoptotiska celler under identiska förhållanden. På grund av dess milda reaktionsförhållanden, Click-iT Plus TUNEL-analysen kan också multiplexeras med fluorescerande proteiner eller färgämnen.

De Click-iT TUNEL Alexa Fluor bildanalyser innehåller alla komponenter som behövs för att exakt och tillförlitligt detektera apoptos i vidhäftande celler odlade på täckglas eller 96-brunnars mikroplattor, och de inkluderar även DNas I för att generera strängbrott för den positiva kontrollen.