Invitrogen™ PFB-FDGlu (5-(Pentafluorobensoylamino)fluorescein di-β -D-Glukopyranosid)

PFB-FDGlu är cellgenomsläppligt och när det laddas in i celler, lokaliseras det till endosomala och lysosomala fack samtidigt som cellens livskraft bibehålls. Vid enzymatisk klyvning av aktiva GCase-enzymer ger det ett grönt fluorescerande färgämne (PFB-F) med excitations-/emissionsmaxima på cirka 492/516 nm. Denna fluorescens kan detekteras med fluorescensmikroskopi, höginnehållsavbildning och flödescytometri, vilket möjliggör specifik encellsanalys av GCase-aktivitet.

Fördelar med PFB-FDGlu för att detektera GCase-aktivitet i lysosomer:

• Hög specificitet —använder ett lysosomalt GCase-substrat för mätning av GCase-aktivitet, vilket säkerställer specifik lysosomal färgning (observera att med långa inkubationer kommer den fluorescerande PFB-F att migrera till cytoplasman)
• Levande cellavbildning —möjliggör bedömning av GCase-aktivitet i intakta, levande celler med minimal påverkan på cellviabiliteten, även med förlängd inkubation
• Encellsanalys möjliggör —specifik encellsanalys med flödescytometri, höginnehållsavbildning och mikroskopi för att skilja mellan olika celltyper
• Ljus fluorescens —ger ett ljust grönt fluorescerande färgämne vid klyvning med GCase, vilket ökar detektionskänsligheten
• Mångsidigt protokoll —kan kombineras med andra fenotypiska indikatorer, såsom livskraftsfläckar och antikroppar, för att identifiera distinkta cellpopulationer eller som ett urvalskriterium för cellsortering

GCase, kodad av GBA1-genen, är ett lysosomalt hydrolas som omvandlar glukosylceramid till glukos och ceramid. Mutationer i GBA1 som leder till GCase-brist kan orsaka lysosomala lagringsstörningar. GCase-brister är inblandade i flera sjukdomar, inklusive Gauchers sjukdom och Parkinsons sjukdom.