Invitrogen™ Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 647 Proteinsyntesanalyssats

De Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 647 Protein Synthesis Assay Kit tillhandahåller en snabb, känslig och icke-radioaktiv metod för detektering av proteinsyntes med hjälp av fluorescensmikroskopi eller höginnehållsavbildning. I denna analys är O-propargyl-puromycin (OPP) effektivt införlivat i nyligen översatta proteiner i kompletta metionininnehållande media och fluorescerande märkt med en ljus, fotostabil Alexa Fluor™ färgämne i en snabb, mycket specifik och mild klickreaktion.

Funktioner i satsen inkluderar:

• Inget mediabyte krävs —fungerar i kompletta, metionininnehållande media, inget behov av att ta bort cellmedia
• Multiplex-—aktiverad Click-iT™ Plus-teknologi behåller signal från GFP och bindning av fluorescerande-konjugerade falloidiner
• Icke-—radioaktivt ett alternativ till de traditionella ³⁵ S-metioninmetoderna
• Works in vivo —publicerade resultat visar användning in vivo för bestämning

av proteintranslation Satsen innehåller O-propargyl-puromycin (OPP), som är en alkynanalog av puromycin (även tillgänglig separat), samt Alexa Fluor™ 647 pikolylazid och alla nödvändiga reagenser för att utföra klickreaktionen. OPP matas till odlade celler och inkorporeras i proteiner under aktiv proteinsyntes. Tillägg av Alexa Fluor™ 647 pikolylazid och Click-reaktionsreagenserna leder till en kemoselektiv ligering, eller ''klick''-reaktion, mellan pikolylazidfärgämnet och OPP-alkynen, vilket gör att de modifierade proteinerna kan detekteras genom bildbaserad analys.

Klickreaktionen använder bioortogonala (biologiskt unika) delar för att fluorescerande märka prolifererande celler, vilket hjälper till att producera låg bakgrund och hög detektionskänslighet. På grund av de milda reaktionsförhållandena, Click-iT™ Plus-analyser detekterar proteintranslationshändelser samtidigt som de möjliggör bevarande av cellmorfologi, bindningen av fluorescensmärkt falloidin och den fluorescerande signalen från GFP.

Till skillnad från ^35S -metionin, som används i traditionella metoder, är OPP inte en aminosyraanalog, så den kan tillsättas direkt till celler i kompletta medier eller användas för att bestämma proteinsyntes in vivo .

Kitet innehåller alla komponenter som behövs för att märka och detektera den inkorporerade OPP i nyligen översatta proteiner i prover av vidhäftande celler. Satsen innehåller tillräckligt med reagens för märkning av 25 18 mmx 18 mm täckglas med 1 ml reaktionsbuffert per test.