Invitrogen™ Monomeriska cyanin-nukleinsyrafläckar

Dessa fem spektralt distinkta monomera cyanin-nukleinsyrafärger är högkänsliga fluorescerande prober för nukleinsyrafärgning. Karbocyaninmonomererna har mycket stark bindningsaffinitet för dsDNA, med dissociationskonstanter i det mikromolära området. Dessa färgämnen innefattar var och en ett enda cyaninfärgämne och en katjonisk sidokedja. Karbocyaninmonomererna är spektralt analoga med motsvarande dimera cyaninfärgämnen; emellertid, med endast två positiva laddningar och en interkalerande enhet, uppvisar dessa färgämnen något reducerad affinitet för nukleinsyror i förhållande till cyanindimererna.

Funktioner hos de monomera cyanin-nukleinsyrafläckarna:
• Hög affinitet —stark bindningsaffinitet för dsDNA med dissociationskonstanter i det mikromolära området
•Låg bakgrundsförsumbar —fluorescens när den inte är bunden till nukleinsyror
•Stor fluorescensförbättring 20- —till 1800-faldig fluorescensförbättring vid bindning till DNA
•Ljus fluorescens höga —extinktionskoefficienter och fluorescenskvantutbyten vilket resulterar i mycket ljusa fluorescenssignaler

Liksom sina dimera motsvarigheter är dessa monomera cyaninfärgämnen typiskt ogenomträngliga för livskraftiga celler och kan användas som indikatorer för döda celler, även om YO-PRO-1 (kat.nr. Y3603) kan vara genomträngande för apoptotiska celler, vilket ger en bekväm indikator på apoptos. De monomera cyaninfärgerna har bred applicerbarhet på grund av deras låga bakgrund och ljusa fluorescens. Användningar inkluderar färgning av nukleinsyror på fasta underlag, förfärgning av prover för gel- eller kapillärelektrofores, viabilitetsdetektion och motfärgning i experiment med flera etiketter.

Fluorescensspektra för de fem monomera cyanin-nukleinsyrafärgerna täcker hela det synliga våglängdsområdet och varje färgämne skiljer sig i extinktionskoefficient och kvantutbyte. Dessa färgämnen kan också användas med ultravioletta trans- eller epi-illuminator-excitationskällor. TO-PRO-1, PO-PRO-1 och YO-PRO-1 färgämnen uppvisar sekundära ultravioletta excitationstoppar nära 275 nm. De monomera cyanin-nukleinsyrafärgningarna uppvisar stora grader av fluorescensförstärkning vid bindning till DNA (eller RNA), varierande från 400 till 1800 gånger för“ 1-serien” och 20- till 200-faldigt för“ 3-serien.” Följaktligen är fluorescensen av obundet färgämne försumbar under de flesta experimentella detektionsförhållanden.

De monomera cyanin-nukleinsyrafärgerna tillhandahålls i en enhetsstorlek av 1 ml som 1 mM lösningar i dimetylsulfoxid (DMSO).

PO-PRO™ -1 jodid (435/455)
Den blåfluorescerande PO-PRO-1-färgen har excitations-/emissionsmaxima∼ 435/455 nm när den är bunden till nukleinsyra. Den kan exciteras av ultravioletta (UV) excitationskällor och He-Cd 442 nm laser.

YO-PRO™ -1 jodid (491/509)
Den grönfluorescerande YO-PRO-1-färgen har excitations-/emissionsmaxima∼ 491/509 nm när den är bunden till nukleinsyra. Den kan exciteras av ultravioletta (UV) excitationskällor och Ar 488 nm-lasern. YO-PRO-1-färgning har använts för att identifiera apoptotiska celler. Apoptotiska celler blir genomträngliga för YO-PRO-1, men förblir ogenomträngliga för propidiumjodid (kat.nr. P3566) och andra döda cellfläckar. Levande celler färgas inte med YO-PRO-1, vilket gör att de kan användas i efterföljande experiment. Nukleinsyrafärgningen YO-PRO-1 ingår också som en apoptosindikator i Vybrant Apoptosanalyssats #4 (kat. nr. V13243) och kromatinkondensation/membranpermeabilitet/apoptoskit för döda celler (kat. nr. V23201).

TO-PRO™ -1 jodid (515/531)
Den grönfluorescerande TO-PRO-1-färgen har excitations-/emissionsmaxima∼ 515/531 nm när den är bunden till nukleinsyra. Den kan exciteras av ultravioletta (UV) excitationskällor och Ar 514 nm-lasern.

YO-PRO™ -3 jodid (612/631)
Den orange-fluorescerande YO-PRO-3-färgen har excitations-/emissionsmaxima∼ 612/631 nm när den är bunden till nukleinsyra. Den kan exciteras av He-Ne 594 nm-lasern.

TO-PRO™ -3 jodid (642/661)
Den långt röda fluorescerande TO-PRO-3-färgen har excitations-/emissionsmaxima∼ 642/661 nm med fluorescens liknande Alexa Fluor 647 eller Cy5 färgämnen. Den långvågiga fluorescensen hos TO-PRO-3-färgningen är väl separerad från den hos vanliga fluoroforer, som t.ex. Alexa Fluor färgämnen, Oregon Green, fluorescein (FITC), rhodamin (TRITC), Texas Red, kumarin (AMCA), Marina Blue och Pacific Blue färgämnen. Dessutom har långvågiga –ljusabsorberande färgämnen såsom TO-PRO-3-färgning fördelen att deras fluorescens vanligtvis inte skyms av autofluorescensen i vävnader.

TO-PRO-3-färgning är användbar som en nukleär motfärgning och indikator för döda celler i fluorescensmikroskopi och flödescytometri, och är bland de mest känsliga sonderna för nukleinsyradetektering. TO-PRO-3 ger stark och selektiv färgning av kärnan i odlade celler och i paraffinsnitt. Samtidig märkning med grönt fluorescerande SYTO färgämne och cellogenomtränglig TO-PRO-3-färgning används ofta för att bedöma cellviabilitet. TO-PRO-3 har en mycket högre extinktionskoefficient än DNA-bunden propidiumjodid och har använts för unika tillämpningar som att detektera mikrobiella celler och mikroorganismer i markmiljöer.

TO-PRO-3 finns även som rumstemperaturstabila, färdiga lösningar:
• NucRed™ Död 647 ReadyProbes™ Reagens (kat.nr. R37113)
• TO-PRO™ 3 Klar Flow™ Reagens (kat. nr. R37170)