Invitrogen™ eBioscience™ Mus Regulatory T Cell Staining Kit #3

Kitinnehåll:

• Anti-Mouse CD4 FITC (RM4-5): 50 μg —Används vid 0,125 μg/test
• Anti-Mouse CD25 PE (PC61.5): 50 μg —Används vid 0,06 μg/test
• Anti-mus/råtta Foxp3 PE-Cy5 (FJK-16s): 25 μg —Används vid 0,5 μg/test
• Råtta IgG2a isotypkontroll PE-Cy5: 25 μg Används —vid 0,5 g/μtest
• Anti-Mouse CD16/32 (Fc Block) Renad: 50 μg —Används vid 1-5 μg/test
• Flödescytometrifärgningsbuffert
• Fixerings-/permeabiliseringskoncentrat: 30mL
• Ingår ej: Isotypkontroller för anti-CD4 (råtta IgG2a, Kat. nr. 11-4321) och anti-CD25 (råtta IgG1, Kat. nr. 12-4301)

FJK-16s-antikroppen reagerar med mus/råtta Foxp3 även känd som FORKHEAD BOX P3, SCURFIN och JM2; korsreaktivitet av denna antikropp mot andra proteiner har inte fastställts. Foxp3, ett 49-55 kDa protein, är en medlem av familjen gaffelhuvud/vingad helix av transkriptionella regulatorer och identifierades som den defekta genen i ''scurfy'' (sf) möss. Konstitutivt högt uttryck av Foxp3-mRNA har visats i CD4+CD25+-regulatoriska T-celler (Treg-celler), och ektopiskt uttryck av Foxp3 i CD4+CD25-celler ger en Treg-fenotyp i dessa celler.

Immunoblotting med FJK-16s antikropp har kartlagt epitopen till aminosyrorna 75-125 i mus-Foxp3-proteinet. Hos människan har denna region visat sig vara alternativt splitsad på mRNA-nivå. Både de alternativt splitsade och icke-skarvade isoformerna finns i CD4+CD25+-undergruppen av lymfocyter. Preliminära RT-PCR-experiment har inte avslöjat denna alternativt splitsade isoform i mussplenocyter, vilket tyder på olika genreglering hos mus och människa.

Intracellulär färgning av mussplenocyter med FJK-16s med användning av Foxp3-färgningsuppsättningarna och protokollet avslöjar cirka 2 % av det totala antalet splenocyter i C57Bl/6-stammen och cirka 3-5 % i BALB/c-musstammen. Flerfärgsflödescytometrisk analys visar att cirka 90 % av CD4+CD25+-cellerna och 4 % av CD4+CD25-cellerna färgas med FJK-16s. B220+, CD11b+, CD11c+ och Ly6G/Gr-1+ celler visar inte signifikant samfärgning med FJK-16s. Dessa data överensstämmer med en färsk rapport som följer uttrycket av Foxp3 med hjälp av en GFP knock-in (Fontenot et al, 2005).

FJK-16s korsreagerar med Foxp3 från råtta Detta har visats genom intracellulär färgning av Foxp3 och flödescytometri av råttsplenocyter med samma metod och reagens som används för musvävnad. Observera att CD4- och CD25-antikropparna som ingår i detta kit endast känner igen musantigener. För färgning av råttvävnad, använd (CD4 FITC kat. 11-0040 och CD25 PE kat. 12-0390).