Invitrogen™ MultiShot™ FlexPlate Stbl3™ Kompetenta celler

MultiShot FlexPlate Stbl3 Kemiskt kompetenta E. coli -celler klonar kompetenta celler som är föralikvoterade i en 96-brunnars PCR-platta för att öka transformationsproduktiviteten. FlexPlate-formatet kan delas upp i valfri kombination av 8-brunnars segment för att möjliggöra flexibilitet i transformationsgenomströmningen.

Uppnå anmärkningsvärd stabilitet hos lentivirala vektorer i Stbl3
MultiShot FlexPlate Stbl3 Kompetenta celler är designade för att klona direkta upprepningar som finns i lentivirala expressionsvektorer eftersom dessa celler minskar frekvensen av homolog rekombination av direkta upprepningar som finns i lentivirala vektorer (t.ex. ViraPower Lentiviral Expression-kit) och andra retrovirala vektorer (t.ex. instabilitetsbenägna HIV-baserade plasmider). De Stbl3 stam har använts för många applikationer, inklusive genomredigering av CRISPR-arbetsflöden (det första ursprungliga protokollet av Zhang-gruppen 2013), vaccinutveckling (inklusive SARS-CoV-2-vaccinforskning) och kloning och underhåll av vektorer med flera upprepningar (t.ex. genkodande protein med upprepad sekvens). Omvandlingseffektiviteten av MultiShot FlexPlate Stbl3 kemiskt kompetenta E. coli -celler är> 1 x 10 ⁷ cfu/μ g plasmid-DNA.

De Stbl3E. coli- stam är härledd från HB101-stammen (med en hybrid K-12- och B-stamgenom). Även om Stbl3 stam innehåller rec A13-allelen av rec A-mutationen som minskar ospecifik rekombinationsförekomst i klonat DNA, förmågan hos Stbl3 stam för att upprätthålla instabila inserts drivs enligt uppgift av andra genetiska egenskaper. Mutationer i Stbl3 metyleringsberoende restriktionssystem ( mcr B, mrr, och hsd S20) möjliggör konstruktion av kloning av genomiskt DNA. Denna stam är ände A1+, sålunda finns ett ospecifikt endonukleas I som smälter DNA i cellerna. Stbl3 ger reproducerbart mycket mer plasmid-DNA än DH-stammar (t.ex. 10 gånger eller mer plasmid-DNA än TOP10 stam) och producerar hållbart lentivirus med hög titer.

MultiShot FlexPlate Stbl3 Kompetenta celler erbjuder:
• Förväntad effektivitet på> 1 x 10 ⁷ transformanter/μ g plasmid-DNA
• Optimal prestanda för spridning av lentivirala vektorer och underhåll av direkta upprepningar
• Förbättrad genomisk DNA-kloningskapacitet ( mcr B, mrr och hsd S20)
• Förmåga att producera höga DNA-utbyten

Obs: För optimal prestanda, Stbl3 celler bör odlas vid 30 C °för att bibehålla plasmid med komplexa upprepade sekvenser. När man utför plasmid-DNA-isolering från Stbl3 celler som har vildtypsendonukleas I ( ände A1+), säkerställer att buffertar innehåller 10 mM EDTA. EDTA kommer att inaktivera endonukleaset och undvika DNA-nicking och vektornedbrytning (följ instruktionerna för plasmid-DNA-reningskit för E. coli -stammar i slutet av A1+).

Öka omvandlingsproduktiviteten med MultiShot FlexPlate-format
FlexPlate är en 96-brunnars PCR-platta som kan användas i automatiserade vätskehanteringssystem eller delas upp i 8-brunnars segment för flexibilitet i transformationsgenomströmningen. Tillägg av DNA till MultiShot FlexPlate Competent Cells kan snabbt utföras med en flerkanalspipett eller ett vätskehanteringssystem. Efter tillsats av DNA kan cellerna effektivt transformeras genom värmechock med hjälp av ett vattenbad, värmeblock eller termisk cykler.

De viktigaste fördelarna med MultiShot FlexPlate-format inkluderar:
• Öka genomströmningen —kompatibel med automatiserade vätskehanteringsplattformar
•Flexibel transformation —i steg om 8 brunnar till hela plattan med 96 brunnar
•Behändiga —kompetenta celler föralikvoterade i 96-brunnars platta, redo för transformation

Genotyp
F^– mcr B mrr hsd S20(rB– , mB– ) rec A13 sup E44 ara -14 gal K2 lac Y1 pro A2 rps L20(StrR) xyl -5λ–leu mtl -

1 Hitta stammen och formatet du behöver
• Andra Stbl-stammar finns med annan genetisk bakgrund.
• En mängd olika E. coli -stammar och format av kemiskt kompetenta celler och elektrokompetenta celler finns också tillgängliga för att möta dina specifika transformationsbehov.
• För transformation med hög genomströmning, välj från vår samling av MultiShot formaterade kompceller.
• Vi erbjuder bakteriella tillväxtmedier i olika format.