Invitrogen™ NovaBright™ Phospha-Light™ EXP Analyskit för SEAP (Secreted Placental Alkaline Phosphatase) Reporter Gendetektion

Detta nya kit ger en mycket enklare procedur än andra analyser. Analysen är homogen och kräver endast två lösningar, båda färdiga att använda. Förlängd kinetik för emission av glödljus ger en stabil ljussignal för lästidsflexibilitet. Analyssignalen mäts i en enkel luminometer utan injektorer. SEAP är ett rapportörprotein som sekreteras i cellkulturmediet och detekteras genom att testa aliquoter av mediet. Eftersom SEAP frigörs i mediet är celllys onödig. Analysen möjliggör dock också detektion av placentaalkalin fosfas (PLAP) isoenzym efter celllys. Känslig detektion av alkalisk fosfatasrapportörenzym möjliggör ett stort antal tillämpningar inom många områden av livsvetenskaplig forskning, inklusive genuttryck, virala funktionsanalyser, vaccinutveckling, utveckling av virala vektorer och genleveransmetoder för genterapi, in vivo genuttrycksövervakning och nya cellulära funktionella analyser. Detta SEAP-test är en av de enklaste och snabbaste metoderna för att optimera transfektionseffektiviteten. Tidigare generationer av NovaBright™ Secreted Placental Alkaline Phosphatase (SEAP) Enzyme Reporter Gene Chemiluminescent Reporter Gene Detection Kit 2.0 har använts i stor utsträckning för reportergenanalyser för att mäta genuttryck i etablerade cellinjer och i transfekterade primärceller, inklusive som en genknockdown/RNA-interferensavläsning. Detta assay har använts för en mängd olika virala funktionella analyser, inklusive virala genuttrycksanalyser, virusreplikation, virusfusogenicitet, virusneutralisering och virusmedierad cell-cell-fusion samt viral infektivitet. Användningen av SEAP-rapportörproteinet är mycket möjlig för in vivo reportergenanalyser genom att analysera serumprover från transgena, transfekterade eller virusvektorinfekterade djur. Reportergenassaysystemet NovaBright™ har använts för att mäta SEAP-nivåer i serum från transgena eller transfekterade hela djur, inklusive mus, råtta, marmoset, apa och grissera, samt i hönsäggets allantoiska vätska. Musens SEAP-protein (mSEAP) har nyligen utvecklats för förbättrad stabilitet i SEAP-proteiner hos transgena möss, och NovaBright™ SEAP-testet har använts för känslig detektion av mSEAP. Utöver rapporterargen- (genuttrycks-) applikationer används assaysystemet för att mäta SEAP som funktionell rapportör för receptor-ligandbindningsanalyser med en SEAP-ligand-kimär, proteasmedierad sekretion och för sekretionsvägens aktivitet. Analyssystemet NovaBright™ har också använts för cellulär mätning av icke-placental alkalin fosfatas som biomarkör.