Macherey-Nagel™ NucleoBond™ AX 100, Midi-kolonner för plasmid-DNA av transfektionsgrad

NucleoBond™ Plasmidreningssatser innehåller NucleoBond™ AX-teknologi, en kiseldioxidbaserad anjonbytare utvecklad för rutinmässig separation av olika klasser av nukleinsyror, vilket möjliggör överlägsen biologisk aktivitet hos de renade nukleinsyrorna och gör stora massutvinningar möjliga genom att minimera ospecifika adsorptionseffekter.
Bakterier som skördats från odlingsbuljongen lyseras med användning av en modifierad alkalisk/SDS-procedur. Både kromosomalt och plasmid-DNA denatureras under dessa alkaliska betingelser. Kaliumacetat tillsätts sedan till det denaturerade lysatet, vilket orsakar bildandet av en fällning som innehåller kromosomalt DNA och andra cellulära föreningar, vilket neutraliserar lysatet. Plasmid-DNA, som förblir i lösning, kan återgå till sin naturliga supercoiled struktur. Efter att ha balanserat lämpligt NucleoBond™ AX kolumn det rensade lysatet appliceras och plasmid-DNA binds till anjonbytarhartset. Efter efterföljande tvättsteg elueras det renade plasmid-DNA:t i en högsaltbuffert och fälls ut med isopropanol. Slutligen rekonstitueras plasmid-DNA:t i TE-buffert för vidare användning. Alternativt NucleoBond™ Finalizer kan användas för koncentration och avsaltning av eluerad plasmid-DNA. NucleoBond™ vikta filter (ingår i kiten Midi (PC 100), Maxi (PC 500), Mega (PC 2 000) och Giga (PC 10 000)) eliminerar centrifugeringssteget efter den alkaliska lyseringen. Filtren minskar“ hands-on” tid och eliminera plastavfall som är vanligt med andra filtreringssystem. Efter cirka 2 minuter (Midi) och 10 minuter (Maxi) av obevakad drift uppnås fullständigt avlägsnande av SDS och cellrester från plasmidprover. NucleoBond™ vikta filter inducerar inte skjuvning av stora DNA-konstruktioner, såsom PACs eller BACs. Kit-typer och deras komponenter: NucleoBond™ Mini (PC 20) - NucleoBond™ AX 20 kolumner, buffertar, RNAse A.NucleoBond™ Midi (PC 100) - NucleoBond™ AX 100 kolumner, buffertar, RNAse A vikt filters.NucleoBond™ Maxi (PC 500) - NucleoBond™ AX 500-kolonner, buffertar, RNAse A, vikta filter XL.NucleoBond™ Mega (PC 2000) - NucleoBond™ AX 2000-kolonner, buffertar, RNAse A, vikta filter XL.NucleoBond™ Giga (PC 10 000) - NucleoBond™ AX 10 000 kolumner, buffertar, RNAse A, vikta filter. Kontakta kundtjänst för ytterligare information om denna produkt.

• NucleoBond™ vikta filter eliminerar centrifugeringssteget för enkel, snabb och bekväm klarning av bakterielysat
• Kolumner drivs av gravitationsflöde, vilket möjliggör rening av flera prover parallellt
• Arbetet sträcker sig från nanogram till milligram DNA
• Återvinning av plasmid-DNA är> 90 %
• DNA av transfektionsgrad
• Hög batch-till-batch-reproducerbarhet
• Ingen användning av organiska lösningsmedel
• Alkoholutfällning av DNA/RNA

Plasmid-DNA-rening med högt och lågt antal kopior från E. coli som är lämplig för transfektion, sekvensering och kloning.