Invitrogen™ Phospha-Light™ SEAP Reporter Gene Assay System

• Detektion av utsöndrad reporter tillåter analys utan att förstöra värdefulla celler
• Brett dynamiskt intervall av alkaliskt fosfatasanalys låter användaren mäta enzymnivån exakt från femtogram till nanogramintervall
• Analyskänsligheten är 100 till 1 000 gånger bättre än med antingen de isotopiska/icke-isotopiska analyserna för kloramfenikolacetyltransferas (CAT) eller de kolorimetriska/fluorescerande analyserna för b-galaktosidas, vilket ger större känslighet än konkurrerande analyser
• Mycket känslig analys med ett brett dynamiskt område tillåter detektering av höga och låga nivåer av reporter utan att behöva utföra flera provspädningar
• Icke-radioaktiva reportergenanalyskit eliminerar oro över användningen av radioisotoper
• Analysen kan slutföras på cirka en timme, vilket ger snabb analysomgång

Övervaka uttryck över tid
Phospha-Light analyssystem möjliggör känslig detektering av utsöndrat alkaliskt fosfatas (SEAP) reporterprotein i cellodlingsmedia. SEAP-genprodukten är en trunkerad form av humant placentalt alkaliskt fosfatas. Ett utsöndrat reporterprotein eliminerar behovet av att framställa cellextrakt. En population av celler kan övervakas över tid och förblir intakt för ytterligare experiment.

Proprietära reagenser för ultrakänslig detektion
Phospha-Light analyssystemet är en av de enklaste och snabbaste metoderna för att optimera transfektionseffektiviteten. En kombination av proprietära reagenser är nyckeln till den mycket känsliga upptäckten som kan uppnås med Phospha-Light analysera. Systemet består av CSPD™ högpresterande alkaliskt fosfatassubstrat, Emerald™ luminescensförstärkare och ett unikt buffertsystem utformat för att specifikt hämma icke-placental endogen alkalisk fosfatasaktivitet. Den ihållande glöden från den kemiluminescerande signalen tillåter användning av luminometrar utan behov av injektorer för mätning.

Ansökningar
Phospha-Light reportergenanalyssystem har använts i stor utsträckning för reportergenanalyser för att mäta genuttryck i etablerade cellinjer och i transfekterade primära celler, inklusive som en knockdown-/RNA-interferensavläsning. Phospha-Light reportergenanalys har använts för en mängd olika virala funktionella analyser, inklusive virala genuttrycksanalyser, viral replikation, viral fusogenicitet, virusneutralisering och virusmedierad cell-cellfusion och viral infektivitet. Användning av SEAP-reporterproteinet är mycket möjliggörande för in vivo-reportergenanalyser, genom att analysera serumprover från transgena, transfekterade eller virala vektorinfekterade djur. Phospha-Light reportergenanalyssystem har använts för att mäta SEAP-nivåer i sera från transgena eller transfekterade hela djur, inklusive sera från mus, råtta, silkesapa, apa och gris, och i allantoisvätska från kycklingägg. Mus-SEAP-proteinet (mSEAP) har nyligen utvecklats för förbättrad SEAP-proteinstabilitet hos transgena möss, och Phospha-Light systemet har använts för känslig detektering av mSEAP.

Specifikationer

• Kompatibla celler: Däggdjursceller
• Detektionsmetod: Kemiluminescerande
• För användning med utrustning: Luminometer (mikroplatta)
• Form: Flytande
• Format: 96-brunnars tallrik
• Hög kapacitetskompatibilitet: Kompatibel med hög kapacitet
• Avläsning: Slutpunkt
• Provtyp (specifik): Cellkulturer
• Substrat: CSPD™
• Substrategenskaper: Kemiskt substrat
• Substrattyp: AP (Alkaliskt fosfatas) Substrat
• Målenzym: Alkaliskt fosfatas