Thermo Scientific™ Active Rap1 Pull-Down and Detection Kit

Active GTPase Pull-Down och Detection Kits mäter aktivering av små GTPaser genom att isolera dem via deras specifika nedströmseffektorer. Kit som är specifika för Arf1, Arf6, Cdc42, Rac1, RalA, Rap1, Ras och Rho GTPaser erbjuds. Den respektive bindningsdomänen för nedströmseffektorn för varje litet GTPas uttrycks som ett GST-fusionsprotein. När det är immobiliserat på ett harts, används detta fusionsprotein för att dra ner det aktiva (dvs. GTP-bundna) GTPaset. Det neddragbara affinitetsreningssteget utförs enkelt och bekvämt med användning av mikrocentrifugspinkolonner. Efter ett enkelt tvättsteg återvinns det bundna GTPaset genom eluering av GST-fusionsproteinet från glutationhartset med användning av SDS-PAGE provladdningsbuffert. Det renade GTPaset detekteras sedan med Western blot med användning av en specifik antikropp som tillhandahålls i varje kit.

Varje GTPase-kit innehåller GST-fusionsprotein från den specifika γbindningsdomänen, GTP S- och GDP-aktivatorer, glutationagarosharts, lysbindande tvättbuffert, primär antikropp, 2X SDS-provbuffert, spinnkolonner och uppsamlingsrör. Varje kit innehåller tillräckligt med komponenter för 30 pull-down-analyser. Satsen är optimerade för Western blot-detektion med en HRP-konjugerad sekundär antikropp (delnr 31460, kanin; artikelnr 31430, mus) med användning av Thermo Scientific SuperSignal™ Väst Pico Kemiluminescerande substrat (delnr 34080).

Höjdpunkter:

• Hög känslighet och noggrannhet– optimerade reagenser, specifika antikroppar och Western blot-procedur säkerställer korrekta kontroller och kvantitativa resultat

• Bekvämlighet– inget behov av att uttrycka och rena dina egna GST-PBD- eller RBD-fusionsproteiner eller använda dyra antikroppsbaserade immunoutfällningsaffinitetshartser

• Hastighet– samtidig inkubation av cellysat med GST-PBD eller RBD och glutationhartset direkt i en högpresterande mikrocentrifugspinkolonn

• Enkel att använda– reagenser och neddragningsförhållanden har optimerats för omedelbar framgång, även för förstagångsanvändare

• Effektivitet– mikrocentrifugens spinnkolonner och uppsamlingsrör ger effektiv separation av vätska och harts, vilket förhindrar provförlust

• Komplett– kit inkluderar reagens för affinitetsrening såväl som kontroller, en kompatibel cellysbuffert och specifik primär antikropp för slutlig Western blot-detektion

GST fusionsproteiner av aktiva GTPas-bindande domäner:

• Raf1 Ras-bindande domän (Raf1-RBD) binder aktivt Ras
• Pak1 p21-bindande domän (Pak1-PBD) binder aktiv Rac1 och Cdc42
• Rhotekin Rho-bindande domän (Rhotekin-RBD) binder aktiv Rho
• RalGDS Rap1-bindande domän (RalGDS-RBD) binder aktiv Rap1
• GGA3-proteinbindande domän (GGA3-PBD) binder aktiv Arf1 och Arf6
• Ral-bindande protein 1 (RalBP1) binder aktivt RalA

Innehåller:

GST fusionsprotein av specifik bindningsdomän, glutationagarosharts, GTP S γoch GDP (100X), lysisbindande tvättbuffert, GTPas-specifik primär antikropp, SDS-PAGE provladdningsbuffert (2X), spinnkolonner och uppsamlingsrör