Thermo Scientific™ Pierce™ BCA Proteinanalyssatser

Pierce BCA Protein Assay Kit är en högprecision, tvättmedelskompatibel proteinanalys för bestämning av proteinkoncentration. Pierce BCA reagenser ger exakt bestämning av proteinkoncentrationen med de flesta provtyper som påträffas i proteinforskning. Pierce BCA analys kan användas för att bedöma utbyten i helcellslysat, affinitetskolonnfraktioner, renade proteinprover, samt för att övervaka proteinkontamination i industriella tillämpningar. Jämfört med de flesta färgbindningsmetoderna BCA analysen påverkas mycket mindre av skillnader i proteinsammansättning, vilket ger större koncentrationsnoggrannhet.

Kitalternativ finns tillgängliga som inkluderar Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards, som är en uppsättning av sju förutspädda BSA-standarder, förpackade i en flerkanalig pipettvänlig tubstrip. Rörremsan innehåller ett enda tomt rör som gör det möjligt för användare att lägga till sin egen provbuffert för blanksubtraktion.

Funktioner av BCA Protein Assay Kit inkluderar:

• Kolorimetrisk —uppskattning visuellt eller mät med en standardspektrofotometer eller plattläsare vid 562 nm
• Exakt —uppvisar hälften av protein-till-protein-variationen som observerats med färgämnesbindningsmetoder (Bradford)
• Kompatibel —opåverkad av typiska koncentrationer av de flesta joniska och nonjoniska rengöringsmedel
• Kort analystid —30 minuters inkubation; mycket enklare och fyra gånger snabbare än klassiska Lowry-metoder
• Linjärt arbetsområde för brett analysområde —för BSA på 20 till 2000μ g/ml
• Känslig —detektering ner till 5μ g/ml med förbättrat protokoll
• Inga fler seriella utspädningsalternativ —inkluderar Dilution-Free BSA Protein Standards som eliminerar behovet av att utföra serieutspädningar när en standardkurva genereras

Hur analysen fungerar

De BCA Protein Assay kombinerar den välkända reduktionen av Cu ²⁺ till Cu ¹⁺ med protein i ett alkaliskt medium med den mycket känsliga och selektiva kolorimetriska detektionen av koppar(Cu ¹⁺ ) med bicinchoninsyra (BCA ). Det första steget är kelering av koppar med protein i en alkalisk miljö för att bilda ett ljusblått komplex. I denna reaktion, känd som biuretreaktionen, bildar peptider som innehåller tre eller fler aminosyrarester ett färgat kelatkomplex med koppar(III)joner i en alkalisk miljö som innehåller natriumkaliumtartrat.

I det andra steget av färgutvecklingsreaktionen, BCA reagerar med den reducerade (koppar(II))katjon som bildades i steg ett. Den intensiva lila-färgade reaktionsprodukten är resultatet av kelatbildning av två molekyler av BCA med en kopparjon. BCA/kopparkomplexet är vattenlösligt och uppvisar en stark linjär absorbans vid 562 nm med ökande proteinkoncentrationer. Komplexet är ungefär 100 gånger känsligare (nedre detektionsgränsen) än den ljusblå färgen för den första reaktionen.

Reaktionen påverkas starkt av fyra aminosyrarester (cystein, cystin, tyrosin och tryptofan) i proteinets aminosyrasekvens. Dock till skillnad från Coomassie färgämnesbindningsmetoder (dvs Bradford), bidrar den universella peptidryggraden också till färgbildning, vilket hjälper till att minimera variationer orsakade av skillnader i proteinsammansättning.