Thermo Scientific™ Pierce™ Bradford Plus Protein Assay Kit

Pierce Bradford Plus Protein Assay Kit är ett färdigt att använda, reducermedelskompatibelt, förbättrat Bradford-analysreagens som används för att snabbt mäta den totala proteinkoncentrationen jämfört med en proteinstandard. Det ger ökad linjäritet och hälften av protein-till-protein-variabiliteten av andra kommersiella Bradford-analysformuleringar.

Kitalternativ inkluderar Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards, som är en uppsättning av sju förutspädda BSA-standarder, förpackade i en flerkanalig pipettvänlig tubstrip. Rörremsan innehåller ett enda tomt rör som gör det möjligt för användare att lägga till sin egen provbuffert för blanksubtraktion.

Funktioner i Pierce Bradford Plus Protein Assay Kit inkluderar:

• Kolorimetrisk —mätning med en standardspektrofotometer eller plattläsare vid 595 nm
• Enkelt att använda —enstaka reagens; ingen fungerande reagensberedning krävs
• Snabb —nästan omedelbar färgutveckling; lägga till, blanda och läs resultat
• Brett analysområde —detekterar proteinkoncentrationer i intervallet 1 till 1500μ g/ml
• Linjär —förbättrad linjäritet och svarslikformighet jämfört med traditionella Bradford-formuleringar
• Flexibla —mikroplattor och kyvettprotokoll tillhandahålls och kan anpassas till flera målarbetsområden
• Seriell –utspädningsfritt —urval kit inkluderar alternativ Dilution-Free BSA-proteinstandarder som eliminerar behovet av att utföra serieutspädningar när en standardkurva genereras

Analysen utförs vid rumstemperatur. Tillsätt bara provet till röret eller brunnen som innehåller reagens, och den resulterande blå färgen mäts vid 595 nm efter en kort inkubation i rumstemperatur. Proteinanalysen är kompatibel med de flesta salter, lösningsmedel, buffertar, tioler, reducerande ämnen och metallkelatbildande medel som påträffas i proteinprover. Analysen kan utföras i antingen provrörs- eller mikroplattaformat.

Hur Bradford Plus-analysen upptäcker protein

Användning av Coomassie G-250 färgämne i ett kolorimetriskt reagens för detektion och kvantifiering av totalt protein beskrevs först av Dr Marion Bradford 1976. I den sura miljön av reagenset binder protein till Coomassie färga. Detta resulterar i en spektral förskjutning från den rödaktiga/bruna formen av färgämnet (absorbansmaximum vid 465 nm) till den blå formen av färgämnet (absorbansmaximum vid 610 nm). Skillnaden mellan de två formerna av färgämnet är störst vid 595 nm, så det är den optimala våglängden för att mäta den blå färgen från Coomassie färgämne-proteinkomplex. Om så önskas kan den blå färgen mätas vid vilken våglängd som helst mellan 575 nm och 615 nm. Vid de två ytterligheterna (575 nm och 615 nm) sker en förlust på cirka 10 % i den uppmätta mängden färg (absorbans) jämfört med den som erhålls vid 595 nm.

Utveckling av färg i Coomassie färgämnesbaserade (Bradford) proteinanalyser har associerats med närvaron av vissa basiska aminosyror (främst arginin, lysin och histidin) i proteinet. Van der Waals krafter och hydrofoba interaktioner deltar också i bindningen av färgämnet genom protein. Antalet Coomassie färgämnesligander bundna till varje proteinmolekyl är ungefär proportionell mot antalet positiva laddningar som finns på proteinet. Fria aminosyror, peptider och lågmolekylära proteiner producerar inte färg med Coomassie färgämnesreagens. I allmänhet måste massan av en peptid eller ett protein vara minst 3000 Dalton för att kunna analyseras med detta reagens.