Thermo Scientific™ Pierce™ Kit för biotinylering och isolering av cellytor

Funktioner i Cell Surface Protein Biotinylation and Isolation Kit inkluderar:
• Förbättrade prestandakit —och protokoll har omdesignats för att förbättra anrikning och extraktion av biotinylerade plasmamembranproteiner samtidigt som intracellulär proteinkontamination minimeras
•Optimerat —protokoll har uppdaterats för att minska bearbetningstiden och antalet steg, och reagensformuleringar optimerade för förbättrad prestanda
•Kompatibla —reagenser har verifierats med suspension och vidhäftande cellinjer, med ytterligare instruktioner för beredning av MS-prov
•Validerade applikationsreagenser —och procedurer är kompatibla med western blotting och

MS-applikationer. Detta lättanvända kit innehåller alla nödvändiga komponenter och procedurer för optimal märkning och efterföljande isolering av cellytproteiner. Buffertar levereras förberedda för att ge konsekventa resultat. Däggdjursceller märks först med EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin, ett tiolklyvbart aminreaktivt biotinyleringsreagens. Celler lyseras därefter och de märkta proteinerna fångas upp med NeutrAvidin Agaros. Ditiotreitol (DTT) används i elueringen för att reducera disulfidbindningarna i biotinmärkningen, vilket resulterar i frisättning av de bundna proteinerna utan biotinmärkningen. Detta kit innehåller tillräckligt med reagens för åtta experiment, bestående av två 85-95 % sammanflytande 15-cm skålar eller fyra 75-cm ² kolvar.

Cellytproteiner representerar en nyckelundergrupp av cellulära proteiner och spelar stora roller i signaltransduktion, celladhesion och jontransport. Dessa proteiner är utmanande att effektivt extrahera och isolera på grund av deras flera membranomspännande domäner. Ofta resulterar de hårda detergenterna och betingelserna som är nödvändiga för effektiv extraktion i denaturering och kontaminering av plasmamembranproteiner efter isolering. Som ett alternativ använder detta kit ett membranogenomträngligt, aminreaktivt, sulfo-NHS-SS-biotin för att effektivt märka cellytproteiner med tillgängliga lysiner. Lyserings-, infångnings-, tvätt- och elueringsförhållandena har optimerats för effektiv anrikning och isolering samtidigt som kontaminering av intracellulära proteiner minimeras.

Protokollet har optimerats för användning med olika däggdjurscellinjer, inklusive adherenta och suspensionsceller, och är användbart för differentiell expressionsanalys mellan behandlade och obehandlade celler eller mellan en eller flera cellinjer. Selektivitet och effektivitet av cellytproteinisoleringen har verifierats genom western blotting och LC-MS-analys.