Thermo Scientific™ Pierce™ Kromogen Endotoxin Quant Kit

Endotoxin är en lipopolysackarid (LPS) som utgör mycket av cellväggens yttre membran hos gramnegativa bakterier. LPS är det vanligaste antigenet på cellytan hos de flesta gramnegativa bakterier. De Thermo Scientific Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit är en mycket känslig slutpunktsanalys som noggrant mäter och detekterar endotoxin i ett protein, peptid, nukleinsyra (DNA eller RNA), vaccin eller antikroppsprov med hjälp av amebocytlysatanalysen. Limulus amebocytlysat (LAL) används i stor utsträckning som en enkel och känslig analys för detektion av endotoxiner.

Funktioner och fördelar med Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit inkluderar:
•Mycket känslig med ett brett —spektrum detekterar så lite som 0,01 EU/mL till 1 EU/mL
• —Specifik ingen störning frånß -glukaner och lämpliga för ett brett urval av prover, inklusive plasma, protein, vaccin, plasmid eller nukleinsyror (DNA och RNA)
• —Utför snabb analys på så lite som 20 minuter

Thermo Scientific Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit är en mycket känslig slutpunktsanalys som använder Limulus amebocytlysat (LAL) som härrör från blodet från hästskokrabban (Limulus polyphemus) för att noggrant mäta och detektera endotoxiner. Endotoxiner kan hittas i ett plasma-, protein-, peptid-, nukleinsyra- eller antikroppsprov. Dessa Chromogenic Endotoxin Quant Kits möjliggör detektion inom breda känslighetsintervall på 0,01 till 1,0 EU/mL* med användning av en standardspektrofotometer eller plattläsare vid 405 410 –nm. Våra flexibla kit låter dig analysera prover i ett lågt intervall av 0,01 –0,1 EU/mL eller i ett högt intervall av 0,1 –1,0 EU/mL, beroende på dina forskningsbehov.

Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit använder amebocytlysatmetoden, som mäter interaktionen mellan endotoxinet och proenzymet Faktor C som finns i cirkulerande amebocyter i hästskokrabban. Den proteolytiska aktiviteten av detta proenzym aktiveras i närvaro av LPS. Endotoxinnivåer bestäms genom att mäta aktiviteten av faktor C i närvaro av det färglösa kromogena syntetiska peptidsubstratet (Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA) som frisätter p-nitroanilin (pNA) efter proteolys, vilket ger en gul färg som kan mätas vid en absorbans av 405m. Den utvecklade färgintensiteten är direkt proportionell mot mängden endotoxin som finns i provet och beräknas med hjälp av en standardkurva för en känd mängd endotoxin. Denna analys har blivit industristandarden för endotoxindetektion i läkemedel, medicintekniska produkter, mat- och vattentester, såväl som biovetenskap och medicinsk forskning.

Föreningen av endotoxin och sjukdom
Endotoxiner frigörs i sin omgivande miljö när gramnegativa bakterier genomgår normal celldelning eller i stora koncentrationer när de skadas eller genomgår cellys. Givna endotoxiner är pyrogena (framkallar feber) hos däggdjur, identifiering och övervakning av endotoxinnivåer är extremt viktigt inom många områden, inklusive studie av mikrobiomet för att bedöma perifert immunsvar av specifik sjukdom. Endotoxiner har associerats med icke-alkoholisk fettleversjukdom (NAFLD), meningokocksjukdom och olika typer av sepsis. Endotoxiner kan vara problematiska hos brännskadapatienter på grund av translokation av endogena bakterier och förlust av vätska, vilket resulterar i GI-relaterad sjukdom som tarmischemi eller tarmskador. Svårighetsgraden av symtomen på sjukdomar som ’Crohns sjukdom, ulcerös kolit och cystisk fibros har också kopplats till mängden LPS i tarmen.

Specificitet för Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kits
När de mäts med Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit, bestäms endotoxinnivåerna i proverna noggrant med hjälp av den inkluderade endotoxinstandarden med känd koncentration som härrör från E.coli-stam O111: B4. Det låga känslighetsintervallet i denna analys tillåter högre utspädning av prover som är begränsade i kvantitet eller innehåller störande ämnen, vilket hjälper till att undvika potentiella falska negativa eller falska positiva vid kvantifiering av endotoxin. Denna analys är också kompatibel med (1,3)-β -D-glukan, en cellväggskomponent av bakterier och svampar. β-glukaner är inte pyrogena, men kan aktivera faktor G och utlösa koagulationskaskaden, vilket ger falska positiva resultat i amebocytlysatanalysen. β-glukanblockerare krävs inte för denna analys och i prover som innehåller≤ 10 ng/ml av (1,3)-β -D-glukan, ingen förbättring uppvisas. Se tabell 1 i datafigurer för mer information om testade reagenser och interaktioner.

Betydelsen av endotoxintestning
Även om endotoxiner inte är infektiösa organismer, är de toxiska och kan utlösa endotoxisk chock, inflammation eller sepsis hos djur och vävnadskulturer. Eftersom dessa föreningar är värmestabila och kan överleva steriliseringsprocedurer är identifiering av endotoxinkontamination extremt viktig. Känslig endotoxintestning är också väsentlig inom biovetenskap och medicinsk forskning på grund av de låga endotoxinnivåer som krävs för cellodling och in vivo djurforskning.

Eliminering och testning av endotoxiner är också nödvändiga i prover producerade från gramnegativa bakterier före celltransfektion eller djurinjektion. Att bestämma endotoxinnivåer är viktigt för att bedöma effektiviteten av endotoxinborttagningsmetoder och förhindra endotoxisk chock, inflammation och/eller sepsis i vävnadsodlingsceller och djur injicerade med endotoxinkontaminerade proteiner.

*En endotoxinenhet/ml (EU/ml) motsvarar ungefär 0,1 ng endotoxin/ml lösning.

Relaterade produkter:
Pierce™ Endotoxinborttagningsharts med hög kapacitet (kat.nr. 88270)
Pierce™ Endotoxinavlägsnande med hög kapacitet Spin-kolonner (kat.nr. 88274)