Thermo Scientific™ Pierce™ Coomassie Strålande blå färgämnen

Coomassie R-250- och G-250-färgämnen är två kemiska former av en disulfonerad triphenylmetanförening som ofta används som grund för färgningar för detektion av proteiner i gelelektrofores och Bradford-typ assay-reagenser för proteinkvantifiering. R-250 (rödtonad) formen saknar två metylgrupper som finns i G-250 (gröntonad) formen, som också kallas kolloidal koomassiefärg.

Vanligtvis formuleras coomassie-gelfärgningar och proteinanalysreagenser som mycket sura lösningar i 25 till 50 % metanol. Under sura förhållanden binder färgämnet till proteiner främst genom basiska aminosyror (främst arginin, lysin och histidin), och antalet koomassiefärgsligander bundna till varje proteinmolekyl är ungefär proportionellt mot antalet positiva laddningar som finns på proteinet. Proteinbindning gör att färgämnet ändras från rödbrunt till klarblått (absorptionsmaximum är 595 nm).

Funktioner inkluderar:

• Enkel detektion—skapar intensivt färgade komplex med proteiner
• Hög känslighet—kan avgöra så lite som 0,5 μg/^cm² protein som finns i en gelmatris
• Reversibel färgningsanjon—av Coomassie Brilliant Blue-färgämnet som bildas i det sura färgningsmediet kombineras med de protonerade aminogrupperna i proteiner genom elektrostatisk interaktion; det resulterande komplexet är reversibelt under rätt förhållanden
• Differentiering mellan bundet och obundet färgämne—när det löses i en 0,01 M citratbuffert vid pH 3,0 har ett absorptionsmaximum vid 555 nm; protein-färgkomplex kännetecknas av en topp något bredare än den fria färgämnets med ett maximum vid 549 nm