Thermo Scientific™ Pierce™ Coomassie Strålande blå färgämnen

Coomassie R-250- och G-250-färgämnen är två kemiska former av en disulfonerad trifenylmetanförening som vanligtvis används som grund för färgningar för detektion av proteiner i gelelektrofores och analysreagenser av Bradford-typ för proteinkvantifiering. R-250-formen (rödtonad) saknar två metylgrupper som finns i G-250-formen (gröntonad), som också kallas kolloidal coomassie-färgämne.

Vanligtvis formuleras coomassie gel-färger och proteinanalysreagens som mycket sura lösningar i 25 till 50 % metanol. Under sura förhållanden binder färgämnet till proteiner främst genom basiska aminosyror (främst arginin, lysin och histidin), och antalet coomassie-färgämnesligander bundna till varje proteinmolekyl är ungefär proportionell mot antalet positiva laddningar som finns på proteinet. Proteinbindning gör att färgämnet ändras från rödbrunt till ljust blått (absorptionsmaximum är 595 nm).

Funktioner inkluderar:
• Enkel detektion —utvecklar intensivt färgade komplex med proteiner
•Hög känslighet —kan avgöra så lite som 0,5μ g/cm² protein närvarande i en gelmatris
•Reversibel färgning —anjon av Coomassie Brilliant Blue färgämne som bildas i det sura färgningsmediet kombineras med de protonerade aminogrupperna i proteiner genom elektrostatisk interaktion; resulterande komplex är reversibel under lämpliga förhållanden
•Differentiering mellan bundet och obundet färgämne —när det lösts i 0,01 M citratbuffert vid pH 3,0, har ett absorptionsmaximum vid 555 nm; protein-färgämneskomplex kännetecknas av en topp något bredare än den för fritt färgämne med ett maximum vid 549 nm