Thermo Scientific™ Pierce™ Dilution-Free™ Snabbt guld BCA Proteinanalys

Pierce Dilution-Free Snabbt guld BCA Protein Assay Kit är en enkel, snabb och exakt analys optimerad för att bestämma den totala proteinkoncentrationen. Det är tvättmedelskompatibelt och har ett 5 gånger bredare dynamiskt område än traditionella proteinanalyser på 0,02 10 –mg/ml. Detta breda dynamiska intervall eliminerar behovet av att späda de flesta prover för att få dem inom analysområdet.

Dessutom Dilution-Free Snabbt guld BCA Protein Assay levereras med en uppsättning av sju förutspädda BSA-proteinstandarder förpackade i en flerkanalig pipettvänlig tubstrip, så inga serieutspädningar krävs. Rörremsan innehåller ett enda tomt rör som gör det möjligt för användare att lägga till sin egen provbuffert för blanksubtraktion. De Dilution-Free Rörlisthållare (kat. nr. A57184) möjliggör enkel hantering på bänken.

Funktioner av Dilution-Free Snabbt guld BCA Protein Assay Kit inkluderar:

• Utspädningsfri —eliminerar behovet av prov- och standardkurvspädningar, vilket minskar inställningstiden med upp till 80 %
• Kort analystid —fem minuter, rumstemperatur reaktion
• Linjärt arbetsområde för brett analysområde —för BSA på 20 till 10 000μ g/ml
• Uniform —uppvisar liknande protein-till-protein variation som traditionella BCA Proteinanalys och mindre protein-till-protein-variation än färgämnesbindande proteinanalysmetoder (Bradford)
• Kompatibel —opåverkad av typiska koncentrationer av de flesta joniska och nonjoniska rengöringsmedel
• Kolorimetrisk —optimal absorbans vid 480 nm
• Noggrann —2X mer exakt än Bradford-analyser

Pierce Dilution-Free Snabbt guld BCA Protein Assay Kit använder samma kopparkelaterande teknologi som den välkända traditionella Pierce BCA Proteinanalys och ger jämförbar noggrannhet, men med en fem minuters inkubation i rumstemperatur och mätt vid 480 nm. Denna förbättring eliminerar behovet av att utföra serie- eller provspädningar, utstå en lång inkubationsperiod eller utsätta proverna för förhöjda temperaturer vilket ger snabbare resultat.

Det traditionella BCA Protein Assay är en allmänt använd och accepterad proteinanalys, pålitlig för sin mycket exakta proteinkoncentrationsbestämning och kompatibilitet med de flesta provtyper som förekommer inom proteinforskning. Men för att utveckla proverna i detta traditionella protokoll måste man antingen värma reaktionen vid °37 C i 30 minuter eller tillåta rumstemperaturutveckling i två timmar. De Dilution-Free Snabbt guld BCA Protein Assay upprätthåller nyckelegenskaperna hos den traditionella BCA analys men tillåter en snabb inkubationstid och rumstemperatur lika med färgbindningsmetoder.

De Dilution-Free Snabbt guld BCA Analys kan användas för att bedöma utbyten i helcellysat och affinitetskolonnfraktioner, samt för att övervaka proteinkontamination i industriella tillämpningar. Liknar den traditionella BCA analys, den Dilution-Free Snabbt guld BCA Analysen påverkas mycket mindre än färgbindningsmetoder av proteinsammansättningsskillnader, vilket ger låg protein-till-protein variation.

Hur Dilution-Free Snabbt guld BCA Protein Assay detekterar protein

De Dilution-Free Snabbt guld BCA Protein Assay använder samma kopparreduktionsmetod som den traditionella BCA Proteinanalys med en unik kopparkelator. Analysen kombinerar den välkända reduktionen av Cu2+ till Cu1+ med protein i ett alkaliskt medium med den mycket känsliga och selektiva kolorimetriska detekteringen av koppar(Cu1+) av den patenterade kelatorn. Det första steget är kelering av koppar med protein i en alkalisk miljö för att bilda ett ljusgrönt komplex. I denna reaktion, känd som biuretreaktionen, bildar peptider som innehåller tre eller fler aminosyrarester ett färgat kelatkomplex med koppar(III)joner i en alkalisk miljö som innehåller natriumkaliumtartrat.

I det andra steget av färgutvecklingsreaktionen, Dilution-Free Snabbt guld BCA kelator reagerar med den reducerade (koppar(I)) katjon som bildades i steg ett. Den intensiva guldfärgade reaktionsprodukten är resultatet av kelering av två molekyler av BCA med en kopparjon. BCA/kopparkomplexet är vattenlösligt och uppvisar en stark linjär absorbans vid 480 nm med ökande proteinkoncentrationer. Komplexet är ungefär 100 gånger känsligare (nedre detektionsgränsen) än den ljusgröna färgen för den första reaktionen.

Reaktionen som leder till färgbildningen påverkas starkt av fyra aminosyrarester (cystein, cystin, tyrosin och tryptofan) i proteinets aminosyrasekvens. Men till skillnad från Coomassie färgämnesbindningsmetoder (dvs. Bradford), den universella peptidryggraden bidrar också till färgbildning, vilket hjälper till att minimera variationer orsakade av skillnader i proteinsammansättning.

Kompatibilitet av Dilution-Free Snabbt guld BCA Proteinanalys

Vissa ämnen är kända för att störa Dilution-Free Snabbt guld BCA Proteinanalys, inklusive de med reducerande potential, kelatbildare och starka syror eller baser. Eftersom de är kända för att störa proteinuppskattningen vid jämna små koncentrationer, undvik följande ämnen som komponenter i provbufferten:

• Askorbinsyra
• EGTA
• Järn
• Oren sackaros
• Katekolaminer
• Oren glycerol
• Lipider
• Tryptofan
• Kreatinin
• Väteperoxid
• Melibios
• Tyrosin
• Cystein
• Hydrazider
• Fenolröd
• Urinsyra
• TCEP
• Thimerosal
• 2-merkaptoetanol

Pierce Dilution-Free Rörlisthållare

Pierce Dilution-Free Tubestrip Holder är ett återanvändbart skumstativ för användning med Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards och ingår i teststorleken på 20 ml på Pierce Dilution-Free Snabbt guld BCA Proteinanalyssats. Den finns även till försäljning separat. Proteinstandardkoncentrationer är tryckta på tubstripshållaren för enkel referens och pipettering på bänkskivan.