Thermo Scientific™ Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit

De Thermo Scientific Pierce Gaussia Luciferase Glow Assay Kit tillhandahåller ett känsligt bioluminescenssystem för att bestämma uttryck av en gen av intresse med en luciferasreporter. Den extremt ljusa och stabila bioluminescenssignalen (halveringstid över 1 timme) produceras i närvaro av Gaussia-Dura luciferasreportern på grund av oxidation av luciferassubstratet coelenterazin (Figur 1). Gaussia luciferas är ett 20 kDa protein från den marina copepoden, Gaussia princeps, som har större proteinstabilitet och signalljusstyrka än eldfluga och naturligt Renilla luciferas. Det bioluminescerande enzymet utsöndras i hög grad i cellodlingsmediet, vilket möjliggör levande cellövervakning av reporteraktivitet. Ljuseffekt som genereras av luciferasreaktionen kan korreleras till mängden Gaussia-luciferasprotein som produceras och används för att bestämma aktiviteten hos promotorn som driver Gaussia-uttrycket.

Funktioner hos Gaussia Luciferase Glow Assay Kit:
•Känslig —högkänslig detektion av Gaussia luciferasaktivitet
•Stabil —ökad signalstabilitet
•Enkel —kräver ingen luminometer med injektorer
•Kompatibla analysreagenser —kompatibla med andra Gaussia-luciferaser
•Automationsvänlig mottaglig för —analyser med hög genomströmning
•Bekvämt —innehåller en universell celllysbuffert och optimerat glödanalysreagens
•Säker gör att —man kan utföra icke-radioaktiva analyser

När den används med Thermo Scientific Gaussia-Dura Luc Vectors, kitet tillhandahåller ett extremt känsligt bioluminescerande reporteranalyssystem för detektering av utsöndrad eller intracellulär luciferasaktivitet från promotor- eller vägaktivering med utökad signalstabilitet. Ljuseffekten som genereras av luciferasreaktionen (emissionsmaximum på 485 nm) indikerar att Gaussia-luciferas transkriberades. Denna ljusemission kan korreleras till mängden producerat luciferasprotein, vilket i sin tur är proportionellt mot aktiviteten hos promotorn för Gaussia-luciferasuttryck och indikerar att målgenens regulatoriska region var aktiv. Denna reaktion kräver inte adenosintrifosfat (ATP ) eller andra kofaktorer. Kitet innehåller cellysbuffert, reaktionsbuffert och substrat och kan användas för att detektera aktiviteten hos alla Gaussia-luciferaser eller derivat som använder coelenterazin som substrat.

Gaussia Luciferase Glow Assay Kit kräver:
Gaussia luciferas och luminometer eller annat instrument som kan övervaka luminescens, som t.ex. Thermo Scientific Varioskan LUX Mikroplattläsare.

Tillämpningar av Gaussia Luciferase Glow Assay Kit:
•Promotorstudier för att analysera cis-regulatoriska element och transagerande faktorer
• Drogscreening
• siRNA och miRNA screening
• Multiplexa analyser för att studera effekter utanför målet
• Sekretorisk väg/proteinlokaliseringsreporteranalyser
• Analys av signaltransduktionsvägar
• RNA splitsningsstudier

Gaussia-Dura-genen som används i Thermo Scientific Gaussia-Dura Luc Vectors härrör från vildtyps-Gaussia-genen och ger lika ljust men mer stabilt ljusutbyte. Gaussia Glow Assay Kit-reagenset ger en Gaussia-Dura luciferasreaktion med kinetik av glödtyp som ger en signal med lägre intensitet men längre varaktighet, vilket möjliggör högre provgenomströmning. Denna analys av glödtyp med en förlängd luminescenssignal kräver inte reagensinjektorer och rekommenderas för luminometrar utan injektorer eller för tillämpningar som kräver batchbearbetning av prover.