Thermo Scientific™ Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit

Thermo Scientific Pierce Gaussia Luciferase Glow Assay Kit tillhandahåller ett känsligt bioluminescenssystem för att bestämma uttryck av en gen av intresse med en luciferasrapportör. Den extremt ljusstarka och stabila bioluminescenssignalen (halveringstid längre än 1 timme) produceras i närvaro av Gaussia-Dura-luciferasrapportören på grund av oxidation av luciferassubstratet coelenterazin (Figur 1). Gaussia luciferas är ett 20 kDa-protein från den marina hoppkräftan Gaussia princeps, som har bättre proteinstabilitet och signalljusstyrka än eldflugan och den inhemska Renilla-luciferasen. Det bioluminescerande enzymet utsöndras starkt i cellkulturmediet, vilket möjliggör levande cellövervakning av reporteraktivitet. Ljusutgången som genereras av luciferasreaktionen kan korreleras med mängden Gaussia-luciferasprotein som produceras och användas för att bestämma aktiviteten hos promotorn som driver Gaussia-uttryck.

Egenskaper hos Gaussia Luciferase Glow Assay Kit:

• Känslig—högkänslig detektion av Gaussia-luciferasaktivitet
• Stabil—ökad signalstabilitet
• Enkel—kräver inte en luminometer med injektorer
• Kompatibla—assayreagenser kompatibla med andra Gaussia-luciferaser
• Automationsvänliga—och lämpade för höggenomströmningsanalyser
• Convenient—innehåller en universell celllysbuffert och optimerad glödprovsreagens
• Safe—gör det möjligt att utföra icke-radioaktiva analyser

När det används med Thermo Scientific Gaussia-Dura Luc-vektorer tillhandahåller kitet ett extremt känsligt bioluminescerande rapporteraranalyssystem för att upptäcka utsöndrat eller intracellulärt luciferasaktivitet från promotor- eller signalvägsaktivering med förlängd signalstabilitet. Ljusutsläppet som genereras av luciferasreaktionen (emissionsmaximum på 485 nm) indikerar att Gaussia-luciferas transkriberades. Denna ljusemission kan korreleras med mängden luciferasprotein som produceras, vilket i sin tur är proportionellt mot promotorns aktivitet för Gaussia-luciferasuttryck och indikerar att den regulatoriska regionen av målgenen var aktiv. Denna reaktion kräver inte adenosintrifosfat (ATP) eller andra kofaktorer. Kitet inkluderar celllysbuffert, reaktionsbuffert och substrat och kan användas för att detektera aktiviteten hos eventuella Gaussia-luciferaser eller derivat som använder coelenterazin som substrat.

Gaussia Luciferase Glow Assay Kit kräver:

Gaussia-luciferas och luminometer eller annat instrument som kan övervaka luminescens, såsom Thermo Scientific Varioskan LUX mikroplattläsare.

Användningsområden för Gaussia Luciferases Glow Assay Kit:

• Promotorstudier för analys av cis-regulatoriska element och transakterande faktorer
• Drogtestning
• siRNA- och miRNA-screening
• Multiplexade analyser för att studera off-target effekter
• Sekretoriska väg-/proteinlokaliseringsrapporteringsanalyser
• Signaltransduktionsvägsanalys
• RNA-skarvningsstudier

Gaussia-Dura-genen som används i Thermo Scientific Gaussia-Dura Luc-vektorerna härstammar från den vildtyp-Gaussia-genen och ger lika starkt men mer stabilt ljus. Gaussia Glow Assay Kit-reagensen ger en Gaussia-Dura luciferasreaktion med glöd-typ kinetik som ger en signal med lägre intensitet men längre varaktighet och möjliggör högre provgenomströmning. Denna glöd-typ test med förlängd luminescenssignal kräver inga reagensinjektorer och rekommenderas för luminometrar utan injektorer eller för tillämpningar som kräver batchbearbetning av prover.