Thermo Scientific™ ActivX™ Destiobiotin-GTP-sond

ActivX™ Destiobiotin-GTP-prober innehåller ett modifierat biotin fäst till nukleotiden genom en labil acyl-fosfatbindning. ActivX aktiva ställenanrikningsprober är fördelaktiga för att bestämma aktiva enzymnivåer genom användning av analogmärkta prober för att möjliggöra profilering av både inaktiva och aktiva enzymer. De ActivX prober berikar selektivt endast de enzymer som är funktionellt aktiva och biologiskt relevanta vid tidpunkten för märkning. Med selektiv anrikning kan man identifiera och profilera målenzymklasser över prover eller kan bedöma specificiteten och affiniteten hos enzymhämmare.

Efter avlägsnande av GTP- eller GDP-nukleotider från enzymer kan destiobiotin-GTP-proben användas för att kovalent modifiera konserverade lysinrester i GTPas-nukleotidbindningsstället. Destiobiotin-GTP kan selektivt berika, identifiera och profilera målenzymklasser i prover. Förinkubation av prover med småmolekylära hämmare som konkurrerar med prober på det aktiva stället kan användas för att bestämma inhibitorbindningsaffinitet och målspecificitet. De ActivX Destiobiotin-GTP-proben märker kovalent det aktiva stället för GTPaser och GTPas-subenheter av G-proteinkopplade receptorer.

Tillämpningar av ActivX Destiobiotin-GTP-sond:
•Bred anrikning av GTP-bindande proteiner från vävnader, celler och subcellulära proteomer
• Anrikning av enzymer baserat på funktion
• Profilering av dussintals till hundratals inhibitormål Bedömning

av märkning av aktiva ställen med destiobioinprober kan utföras med antingen Western blot eller masspektrometri (MS). För Western blot-arbetsflödet berikas destiobiotinmärkta proteiner för SDS-PAGE-analys och efterföljande detektion med specifika antikroppar. För MS-arbetsflödet reduceras destiobiotinmärkta proteiner, alkyleras och smälts enzymatiskt till peptider. Endast destiobiotinmärkta peptiderna med aktiva ställen berikas för analys med LC-MS/MS. Båda arbetsflödena kan användas för att bestämma inhibitormålbindning, men endast MS-arbetsflödet kan identifiera globala inhibitormål och off-targets.

Dessa produkter är föremål för en etikettlicens för begränsad användning.