Thermo Scientific™ Hoechst 33342-lösning (20 mM), 5 ml

FluoroPure-klassade™ Hoechst och DAPI-pulver tillverkas med strikta reningsprocesser för att minimera föroreningar som kan störa fluorescensavbildning. Detta säkerställer att DAPI ger Hoechst tillförlitliga och konsekventa resultat med minimal bakgrundsbrus. De >98 % renheten hos FluoroPure kvalitetsreagenser gör dem särskilt lämpliga för krävande tillämpningar som superupplöst mikroskopi och levande cellavbildning, där exakt och noggrann visualisering av DNA är avgörande.

DAPI (1,6 meter – Diamidino-2 – fenylindol):

DAPI 4',6-diamidino-2-fenylindol är en blå fluorescerande sond som fluorescerar starkt när den selektivt binder till den mindre fåran i dubbelsträngat DNA, där dess fluorescens är ungefär 20 gånger större än i det icke-bundna tillståndet. Dess selektivitet för DNA och höga cellpermeabilitet möjliggör effektiv färgning av kärnor med lite bakgrund från cytoplasman och effektiv kontrastering vid IHC-färgning samt rumslig transkriptomik och proteomikvävnadsavbildning. DAPI är en klassisk nukleär motfärgning för immunofluorescensmikroskopi, samt en viktig komponent i höginnehållsscreeningmetoder som kräver cellbaserad kvantifiering av DNA-innehåll och segmentering (t.ex. em 341/452 nm).

DAPI som dilaktatpulver är mer vattenlösligt än dihydrokloridsaltet och därför ett bättre val för att förbereda buljonglösningar i vatten.

För att göra en 5 mg/ml DAPI-fondlösning (14,3 mM för dihydroklorid eller 10,9 mM för dilactaten), lös innehållet i en flaska (10 mg) i 2 ml dejoniserat vatten (dH₂O) eller dimetylformamid (DMF). Den mindre vattenlösliga DAPI-dihydrokloriden kan ta tid att helt lösas i vatten och sonikering kan vara nödvändig.

Notera: Ingen av dessa DAPI-derivat är särskilt lösliga i PBS för Stock Solution.

Späd ut DAPI-lagerlösningen 1:5000 (eller 1:1000 för 1 mg/ml DAPI 62248) i ultrarent vatten eller PBS (1 μg/ml DAPI). Filtrera arbetslösningen för att ta bort färgaggregat som kan resultera i punktationssignal.

Hoechst 33342, trihydroklorid, trihydrat och Hoechst 33258, pentahydrat (bis-bensimid):

Våra Hoechst färgämnen är välkända fluoroforer som används i stor utsträckning för DNA-färgning i både levande och fixerade celler. Med sin exceptionella affinitet och specificitet för DNA fungerar dessa färgämnen som utmärkta målmedaljer som kan konjugeras till olika molekyler, vilket gör att de kan kopplas till DNA.

Färgämnena Hoechst inkluderar Hoechst vanligtvis 33258, Hoechst 33342 och Hoechst 34580. Dessa bisbensimidfärger, som utvecklades av det tyska företaget Hoechst AG i början av 1970-talet, har sedan dess använts flitigt för DNA-färgning.

Färgämnen, som exciteras av UV-ljus, Hoechst avger ett brett spektrum av blått ljus. Vid bindning till DNA ökar deras fluorescens ungefär 30 gånger, vilket säkerställer ett starkt signal-brus-förhållande. Denna fluorescensförstärkning är resultatet av undertryckt rotationsrelaxation och hydratiseringsreduktion vid DNA-bindning (t.ex. 360/460 nm).

Hoechst färgämnen är icke-interkalerande och binder specifikt till den mindre fåra i DNA vid A-T-rika –regioner. Denna unika bindningsmekanism möjliggör exakt och pålitlig DNA-färgning.

Oavsett om du arbetar med levande eller fixerade celler är våra Hoechst färgämnen kompatibla med immunohistokemiska tillämpningar. Dessutom inducerar bindningen av Hoechst 33342 till DNA minimal cytotoxicitet, vilket säkerställer cellernas livskraft.

Även om alla tre Hoechst färgämnen har liknande användningsområden har de små skillnader i sina egenskaper. Hoechst 33342, till exempel, är betydligt mer cellgenomsläpplig tack vare tillsatsen av en lipofil etylgrupp, vilket gör den till det föredragna valet för levande cellfärgning. Å andra sidan Hoechst uppvisar 34580, med sin dimetylamingrupp istället för fenolen, ett förskjutet emissionsmaximum vid 490 nm, jämfört med 461 nm för Hoechst 33258 och Hoechst 33342.

Hoechst 33258, Pentahydrat är också känt som bis-Bensimid.

Tillämpning av DAPI och Hoechst fluorescerande färgämnen:

• DNA-färgning—används ofta för DNA-färgning i fluorescensmikroskopi och flödescytometri. Den binder till den mindre fåra av dubbelsträngat DNA och avger blå fluorescens när den exciteras av ultraviolett (UV) ljus. Detta gör det möjligt för forskare att visualisera och kvantifiera DNA i celler, vävnader och kärnor.
• Cellcykelanalys används—i stor utsträckning för att analysera cellcykeln. Genom att färga celler med detta färgämne och använda flödescytometri eller fluorescensmikroskopi kan forskare identifiera och kvantifiera olika faser av cellcykeln, såsom G1-, S- och G2/M-faserna. Denna analys ger insikter i cellproliferation, cellcykelprogression och avvikelser i cellcykeln.
• Kärnmorfologi och kromatinorganisation—studerar kärnmorfologi och kromatinorganisation. Genom att visualisera DNA:t i kärnan kan forskare undersöka förändringar i kärnans storlek, form och kromatinkondensation, vilka är kopplade till olika cellulära processer och förhållanden.