Thermo Scientific™ Immobiliserat papain (agarosharts)

Papain är ett ospecifikt, cystein-endopeptidas isolerat från papayalatex som används i en mängd olika tillämpningar. När IgG-molekyler inkuberas med papain i närvaro av cystein delas en eller flera peptidbindningar i gångjärnsregionen, vilket ger tre fragment av liknande storlek: två Fab-fragment och ett Fc-fragment. Fc-fragmenten kan separeras från Fab-fragmenten med användning av immobiliserat protein A eller genom jonbyteskromatografi. Fc-fragmentet på 50 kilodalton används ofta för att bestämma specificiteten för Fc-receptorerna utan interferens från antigenbindning. Fab-fragment är användbara i immunhistokemiska studier eftersom fragmenten penetrerar vävnaden bättre än intakt IgG. Ospecifik bindning från Fc-receptorer undviks också genom att endast använda Fab-delen av immunglobulinet. Papain kan också användas för att generera F(ab')2-fragment. För att framställa F(ab')2-fragment aktiveras papainet först med 10 mM cystein, som sedan avlägsnas via gelfiltrering. Om inget cystein är närvarande under papain-digestionen kan F(ab')2-fragment genereras. Dessa fragment är ofta inkonsekventa och reproducerbarhet är ett problem. Immobiliserat papain kan ersätta fritt papain i nästan alla tillämpningar och är fördelaktigt eftersom det praktiskt taget eliminerar autolys, eliminerar kontaminering av ett prov med proteaset och tillåter kontroll av matsmältningen genom att ta bort papainet eller kontrollera flödet av prov över en immobiliserad papainkolonn. Immobiliserat papain är också mer stabilt mot värmeinducerad denaturering, vilket resulterar i längre upprätthållande av aktivitet.

Höjdpunkter:

• Stöd: Tvärbunden 6% pärlformad agaros
• Specifik aktivitet: 16-40 BAEE-enheter/ml papain före laddning
• Laddar: 250 μg papain/ml gel
• Form: Uppslamning i 50 % glycerol, 0,1 M Na-acetat, pH 4,4, 0,05 % natriumazid

Ytterligare funktioner:

• Alternativt namn: Papaya peptidase I
• Klyver något ospecifikt vid exponerade rester
• Källa: Carica papaya latex Molekylvikt: 23 000
• Proteastyp: Cysteinproteas
• För antikroppsfragmentering, klyvs till Fab- eller F(ab')2-fragment
• Reaktionsförhållanden pH 6 till 7, 20 till 37 °C
• Inhibitorer: tungmetaller, karbonyler, NEM, p-klormerkurobensoat, E-64