Thermo Scientific™ Pierce™ Monomer avidinagaros

Pierce Monomeric Avidin Kit och hartser är unika bland biotinbindande stöd genom att tillåta icke-denaturerande affinitetsrening av biotinylerade molekyler. Det immobiliserade monomera avidinproteinet binder biotin med hög specificitet och måttlig affinitet, vilket gör att icke-biotinmolekyler kan tvättas bort och sedan de bundna biotinmärkta molekylerna konkurrerande elueras med användning av 2 mM biotin i fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Denna teknik ger de skonsammaste elueringsförhållandena för biotinylerat proteinrening och undviker kontaminering och andra problem som är förknippade med traditionella avidin- och streptavidinmetoder. Den monomera avidinkolonnen kan sedan regenereras genom att använda 0,1 M glycin för att strippa kolonnen av kvarvarande bundet biotin utan att förlora förmågan att binda ett annat biotinylerat prov.

Med typiskt avidin eller streptavidin är biotinbindningsaffiniteten (Kd ≤sup>10-15 M) så stor att rening med dessa traditionella medier kräver denaturerande betingelser för eluering, såsom 8M Guanidin ·HCl vid pH 1,5 eller kokning i reducerande SDS-PAGE provladdningsbuffert. Förutom deras ogynnsamma effekter på det biotinylerade proteinet av intresse orsakar sådana hårda elueringsbetingelser typiskt att främmande proteiner (dvs. avidin- eller streptavidinsubenheterna) avlägsnas från hartset och samelueras med den önskade reningsprodukten. Däremot när avidin kopplas till ett harts (t.ex. tvärbunden pärlformad agaros eller UltraLink Harts) som subenhetsmonomer, bibehålls dess specificitet för biotin, men dess biotinbindande affinitet minskar till en nivå (Kd ≤sup>10-8 M ) som gynnar efterföljande eluering.

Höjdpunkter:

• Icke-denaturerande– renar biotinylerade produkter med milda elueringsförhållanden (2 mM fritt biotin)

• Återanvändbar– Monomerisk avidinagaros kan regenereras och återanvändas minst 10 gånger, med endast en marginell förlust av biotinbindningskapacitet (ungefär 2,5 % minskning per regenerering)

• Specifik– bibehåller biotinbindande specificitet och låg ospecifik bindning av nativt avidin

• Flexibel– binder prover i en mängd olika fysiologiska buffertar och eluerar antingen med 0,1 M glycin eller genom konkurrens med 2 mM biotin

• Bra bindningsförmåga– mer än 1,2 mg biotinylerad BSA/ml harts

• Bekväm– köp fristående agaros eller UltraLink™ Hartser eller en komplett reningssats med förpackad kolonn och buffertar

Objektspecifika egenskaper:

• Agarose Resins och Kit är baserade på tvärbunden 4% pärlformad agaros
• UltraLink Harts är ett akrylamidstöd (UltraLink Biostöd)

Innehåller:

Satsen innehåller en förpackad kolonn av monomer avidinagaros och bindnings- och elueringsbuffertar.