Thermo Scientific™ Pierce™ Kolorimetrisk proteasanalyssats

Dessa kolorimetriska och fluorescerande proteasasaskit består av två olika metoder för att mäta total proteasaktivitet i biologiska prover. Båda kiten kan användas för att bedöma framstegen i proteasreningsprocedurer eller för att kvantifiera proteaskontaminering i proteinprover. Kiten använder succinylerad eller fluoresceinmärkt kasein som proteassubstrat. Proteolys av substratet resulterar i peptider vars aminogrupper eller förändrade fluorescensegenskaper möjliggör detektion i respektive kit. Protease-aktivitet kvantifieras genom att jämföra med trypsinstandarden som ingår i varje kit.

Höjdpunkter:

• Kaseinsubstrat – mäter aktiviteten hos varje proteas som klyver kasein i peptidfragment
• Trypsinstandarden – kvantifierar proteasaktivitet i förhållande till trypsin, en universellt accepterad referens
• Känslig – 1000 gånger känsligare än tester som använder omodifierade former av kasein
• Enkla och snabba – provrörs- och mikroplattprotokoll slutförs på mindre än en timme
• Endast homogena – additionssteg; inga separation, överförings- eller stoppsteg krävs
• Anpassningsbart – och enkelt anpassa tid, temperatur och pH för att optimera känsligheten för proteaser av intresse

Colorimetric Protease Assay Kit (Del nr 23263) använder fullt succinylerad kasein som substrat för analysen. Hydrolys av detta substrat i närvaro av proteas resulterar i frisättning av peptidfragment med fria aminoterminala grupper. Dessa peptider reagerar med trinitrobensensulfonsyra (TNBSA), följt av mätning av absorptionsökningen som uppstår vid bildandet av gulfärgade TNB-peptidaddukter.

• Substrat: succinylerad kasein (inte tillgänglig separat)
• Analysens grund: påvisning av primära aminer som uppstår vid proteolys
• Detektionsreagens: trinitrobensensulfonsyra (TNBSA)
• Mätning: absorption vid 450 nm (plattläsare eller spektrofotometer)

Fluorescent Protease Assay Kit (Del nr 23266) inkluderar fluoresceinmärkt kasein som substrat för att bedöma proteasaktivitet i ett prov antingen genom fluorescensresonansenergiöverföring (FRET) med en standardfluorometer eller fluorescenspolarisation (FP) med kapabel instrumentering. FTC-kasein är ett naturligt kasein som har märkts med ett stort molärt överskott av fluoresceinisotiocyanat (FITC). Fluorescensegenskaperna hos detta starkt märkta, intakta proteinsubstrat förändras dramatiskt vid nedbrytning av proteaser, vilket resulterar i en mätbar indikation på proteolys.

• Substrat: fluoresceinmärkt kasein (FITC-kasein); tillgänglig separat som Del nr 23267
• Grunden för analysen: förändring i fluorescensresonans (FRET) eller fluorescenspolarisation (FP)
• Mätning: instrument med fluorescein-excitations- och emissionsfilter (485/538nm)

Innehåller:

Modifierad kasein, trypsin standard och Tris-buffrad saltlösning (båda kit); TNBSA-lösning (endast Del nr 23263)

Rekommenderas för:

Bedöma funktionell integritet och övergripande framsteg i proteasrening; Kvantifiera proteasförorening i proteinprover; Karaktärisera aktiviteten hos ovanliga proteaser jämfört med trypsin; Utvärdera buffertvillkor för deras påverkan på proteasfunktion och aktivitet