Thermo Scientific™ Pierce™ Kolorimetrisk proteasanalyssats

Dessa kolorimetriska och fluorescerande proteasanalyssatser omfattar två olika metoder för att mäta total proteasaktivitet i biologiska prover. Båda kiten kan användas för att bedöma framstegen i proteasreningsprocedurer eller för att kvantifiera proteaskontamination i proteinprover. Satsen använder succinylerat eller fluoresceinmärkt kasein som ett proteassubstrat. Proteolys av substratet resulterar i peptider vars aminogrupper eller förändrade fluorescensegenskaper möjliggör detektion i respektive kit. Proteasaktivitet kvantifieras genom jämförelse med trypsinstandard som ingår i varje kit.

Höjdpunkter:

• Kaseinsubstrat– mäta aktiviteten av något proteas som klyver kasein till peptidfragment

• Trypsin standard– kvantifiera proteasaktivitet i förhållande till trypsin, en allmänt accepterad referens

• Känslig– 1000 gånger känsligare än analyser som använder omodifierade former av kasein

• Enkelt och snabbt– Protokoll för provrör och mikroplattor är klara på mindre än en timme

• Homogen– endast tilläggssteg; inga separerings-, överförings- eller stoppsteg krävs

• Anpassningsbar– anpassa enkelt tid, temperatur och pH för att optimera känsligheten för proteaser av intresse

Den kolorimetriska proteasanalyssatsen (delnr. 23263) använder helt succinylerat kasein som substrat för analysen. Hydrolys av detta substrat i närvaro av proteas resulterar i frisättning av peptidfragment med fria aminoterminala grupper. Dessa peptider reageras med trinitrobensensulfonsyra (TNBSA), följt av mätning av absorbansökningen som resulterar från bildningen av gulfärgade TNB-peptidaddukter.

• Substrat: succinylerat kasein (ej tillgängligt separat)
• Analysens grund: detektion av primära aminer som härrör från proteolys
• Detektionsreagens: trinitrobensensulfonsyra (TNBSA)
• Mätning: absorbans vid 450nm (plattläsare eller spektrofotometer)

Den fluorescerande proteasanalyssatsen (delnr. 23266) inkluderar fluoresceinmärkt kasein som ett substrat för att bedöma proteasaktivitet i ett prov genom antingen fluorescensresonansenergiöverföring (FRET) med en standardfluorometer eller fluorescenspolarisation (FP) med kapabel instrumentering. FTC-kasein är nativt kasein som har märkts med ett stort molärt överskott av fluorescein isotiocyanat (FITC). Fluorescensegenskaperna hos detta kraftigt märkta, intakta proteinsubstrat förändras dramatiskt vid nedbrytning av proteaser, vilket resulterar i en mätbar indikation på proteolys.

• Substrat: fluoresceinmärkt kasein (FITC-kasein); tillgänglig separat som artikelnummer 23267
• Bas för analys: förändring i fluorescensresonans (FRET) eller fluorescenspolarisation (FP)
• Mätning: instrument med fluoresceinexcitation och emissionsfilter (485/538nm)

Innehåller:

Modifierat kasein, trypsinstandard och Tris-buffrad saltlösning (båda kit); TNBSA-lösning (endast artikelnummer 23263)

Rekommenderas för:

Bedöm funktionell integritet och övergripande framsteg av proteasrening; Kvantifiera proteaskontamination i proteinprover; Karakterisera aktiviteten hos ovanliga proteaser jämfört med trypsin; Utvärdera buffertförhållanden för deras inverkan på proteasfunktion och aktivitet