Thermo Scientific™ Proteaser av masspektrometriklass

• Exceptionell selektivitet—har trypsin 95 >% C-terminal lysin- och argininspecificitet; LysC har >90 % C-terminal lysinklyvningsspecificitet
• Hög renhet, —ingen påvisbar chymotrypsinaktivitet (trypsin)
• Fullständig kombination av trypsin/LysC-enzym i matsmältningen—minskar tryptiska missade klyvningar
• Förstärkt stabilitet—av trypsin kemiskt modifierat för minskad autolytisk aktivitet
• Bekväma—enzymer erbjuds i stabila kyl- eller vätskeformat

Trypsinproteas är en massespektrometri (MS)-grad serinproteas som härstammar från gris-pankreasextrakt och specifikt klyver vid karboxylsidan av lysin- och argininrester. Enzymet behandlas med TPCK för att eliminera chymotryptisk aktivitet och modifieras kemiskt genom metylering, vilket ger en mycket aktiv och mer stabil form av enzymet. Trypsin Protease kan tåla vanliga delvis denaturerande tillstånd, såsom 0,1 % SDS, 1 M urea och 10 % acetonitril. Trypsin Protease är mest aktivt vid pH 7 till 9 och kan reversibelt inaktiveras vid pH < 4. Trypsin kan köpas som lyofiliserad i 1-mg 5-pack om 20 μg eller 100 μg och i lösning på 100 μg.

Lys-C Protease är en massespektrometri (MS)-klassad serinproteas isolerad från Lysobacter-enzymogen. Lys-C Protease har hög aktivitet och specificitet för lysinrester, vilket resulterar i större peptider och mindre provkomplexitet än trypsin (dvs. färre peptider). Till skillnad från trypsin kan Lys-C Protease klyva lysiner följt av prolin, vilket gör det idealiskt för sekventiell proteinnedbrytning följt av trypsin för att minska missade klyvningar. Dessa unika egenskaper hos Lys-C Protease säkerställer hög nedbrytningseffektivitet när de används ensamma eller följs av tryptisk nedbrytning. Dessutom har Lys-C-prototypiska peptider vanligtvis högre laddningstillstånd, vilket gör dem till ett enzym som föredras för användning vid ETD-fragmentering.

Lys-C-protesa används ofta i fosfopeptidanrikningsarbetsflöden eftersom det genererar peptider med primära aminer vid både N- och C-terminalen, vilket gör att fragmenten kan dubbelmärkas med amine-reaktiva isobara taggar. Detta resulterar i förbättrad peptidjonisering och förbättrade kvantifieringsgränser eftersom fler fragmentjoner kan återisoleras under MS3-insamling. Detta enzym kan användas för in-lösning eller gel-nedbrytning för att producera peptider för identifiering av LC-MS/MS-proteiner.

Effektiv proteinnedbrytning kan genomföras på två timmar vid 37 °C. Lys-C Protease förblir aktiv under starkt denaturerande förhållanden, såsom 8 M urea, 2 M guanidin-HCl, 1 % SDS, 2 % CHAPS och 40 % acetonitril, och fungerar väl vid pH 7 – 9 (maximal aktivitet vid pH 8). Detta lyofiliserade enzym har en massa på 30 kDa och är stabilt i ett år när det lagras vid – 20 °C. Detta Lys-C-enzym är förpackat lyofiliserat (20 μg eller 100 μg mängder).

Trypsin/Lys-C Protease Mix är en lyofiliserad blandning av trypsin och LysC-proteaser som har optimerats för att förbättra proteinernas nedbrytningseffektivitet. Även om trypsin rutinmässigt används för proteinnedbrytning är denna proteas ensam inte tillräcklig för att helt bryta ner proteiner vid karboxyländen av lysin- och argininrester. Därför kombineras Lys-C-proteas ofta med trypsin för att sekventiellt bryta ner proteiner med färre missade klyvningar. Trypsin/Lys-C Protease Mix erbjuds i flexibla format på 20 μg, 5 x 20 μg eller 100 μg. Matsmältningen kan slutföras på så lite som 1,5 – 3 timmar eller upp till över natten, beroende på enzym-till-protein-förhållande.

Chymotrypsin, GluC, Asp-N-proteaser

• Ökad sekvenstäckning—och bättre proteinkaraktärisering beror på överlappande peptider med komplementära kromatografiska, jonisations- och fragmenteringsegenskaper
• Hög specifik aktivitet, —varje proteas har utmärkt enzymatisk specificitet
• Stabilt tillhandahållet—i ett lyofiliserat format

Asp-N Protease är en MS-klassad zinkmetalloproteinas som härstammar från en mutant stam av Pseudomonas fragi och kräver en spårmängd zink för aktivitet. Asp-N Protease klyver främst på aminosidan av aspartat och cysteinsyra som uppstår vid cysteinoxidation. Klyvning kan också ske vid glutaminsyra; dock är klyvningshastigheten vid glutamylresterna signifikant lägre än klyvningshastigheten vid asparaginsyraresten. Asp-N Protease kan effektivt bryta ner protein på 2 – 20 timmar vid 37 °C med en aktivitet över 20 000 enheter/mg protein och förblir aktiv under denatureringsförhållanden, såsom 1 M urea, 2 M guanidin·HCl, 0,1 % SDS, 2 % CHAPS och 10 % acetonitril, med optimal aktivitet vid pH 6 – 8. Detta lyofiliserade enzym har en massa på 27 kDa och är stabilt i ett år när det lagras vid -20 °C.

Glu-C Protease, även kallad V-8-proteas, är en MS-klassad serinproteas isolerad från Staphylococcus aureus. Glu-C-protease klyver specifikt karboxylsidan av glutaminsyrarester i ammoniumbikarbonat- och ammoniumacetatbuffertar och genererar ett begränsat antal peptidfragment. Klyvning kan också ske vid både glutaminsyra och asparaginsyra i fosfatbuffertar. Glu-C Protease kan effektivt bryta ner protein på 5 – 18 timmar vid 37 °C med en aktivitet över 500 enheter/mg protein och förblir aktivt under denatureringsförhållanden, såsom 2 M urea, 1 M guanidin·HCl, 0,1 % SDS, 2 % CHAPS och 20 % acetonitril. Glu-C-proteasaktiviteten är optimal vid pH 8. Detta lyofiliserade enzym har en massa på 27 kDa och är stabilt i ett år när det lagras vid -20 °C.

Chymotrypsin Protease är en MS-klassad endoproteinas isolerad från bovin bukspottkörtel som specifikt klyver vid karboxylsidan av tyrosin, fenylalanin, tryptofan och leucin. Två dominerande former av chymotrypsinproteas, A och B, finns i lika stora mängder i bovin bukspottkörtel. De är liknande proteiner (80 % homologi) men har olika proteolytiska egenskaper. Båda formerna av chymotrypsinproteas finns i Thermo Scientific Chymotrypsin Protease. Eftersom trypsin kan samrena med chymotrypsinproteas från naturliga källor, har Chymotrypsin Protease behandlats med TLCK för att eliminera potentiell tryptisk aktivitet och förbättra matsmältningsspecificiteten. Chymotrypsin Protease kan tolerera milda denatureringstillstånd, såsom 0,1 % SDS, 2 M urea, 2 M guanidin·HCl, 1% CHAPS och 30% acetonitril, med optimal aktivitet vid pH 7,5 – 8,5. Detta lyofiliserade enzym har en massa på 25 kDa och är stabilt i ett år när det lagras vid -20 °C.