Thermo Scientific™ Proteaser av masspektrometriklass

•Exceptionell selektivitet —trypsin har> 95 % C-terminal lysin- och argininspecificitet; LysC har> 90 % C-terminal lysinklyvningsspecificitet
•Hög renhet —ingen detekterbar kymotrypsinaktivitet (trypsin)
•Komplett digestion —trypsin/LysC enzymkombination minskar tryptiska missade klyvningar
•Förbättrad stabilitet —trypsin kemiskt modifierat för minskad autolytisk aktivitet
•Behändiga —enzymer tillhandahålls i stabila lyofiliserade eller flytande format

Trypsinproteas är ett masspektrometrisk (MS)-gradigt serinproteas som härrör från pankreasextrakt från svin som specifikt klyver vid karboxylsidan av lysin- och argininrester. Enzymet är TPCK-behandlat för att eliminera kymotryptisk aktivitet och kemiskt modifierat genom metylering, vilket ger en mycket aktiv och mer stabil form av enzymet. Trypsinproteas kan tolerera vanliga delvis denaturerande tillstånd, såsom 0,1 % SDS, 1 M urea och 10 % acetonitril. Trypsinproteas är mest aktivt vid pH 7 till 9 och kan inaktiveras reversibelt vid pH< 4. Trypsin kan köpas lyofiliserat i 1 mg 5-pack om 20μ g eller 100μ g kvantiteter och i lösning vid 100μ g.

Lys-C Protease är ett masspektrometrisk (MS)-grade serinproteas isolerat från Lysobacter enzymogenes. Lys-C-proteas har hög aktivitet och specificitet för lysinrester, vilket resulterar i större peptider och mindre provkomplexitet än trypsin (dvs. färre peptider). Till skillnad från trypsin kan Lys-C Protease klyva lysiner följt av proliner, vilket gör det idealiskt för sekventiell proteinnedbrytning följt av trypsin för att minska missade klyvningar. Dessa unika Lys-C-proteasegenskaper säkerställer hög matsmältningseffektivitet när de används ensamma eller följs av tryptisk matsmältning. Dessutom har Lys-C prototypiska peptider vanligtvis högre laddningstillstånd, vilket gör det till ett valfritt enzym för användning med ETD-fragmentering.

Lys-C-proteas används vanligtvis i arbetsflöden för anrikning av fosfopeptider eftersom det genererar peptider med primära aminer vid både N- och C-terminalen, vilket gör att fragmenten kan dubbelmärkas med aminreaktiva isobariska taggar. Detta resulterar i förbättrad peptidjonisering och förbättrade gränser för kvantifiering eftersom fler fragmentjoner kan återisoleras under MS3-förvärv. Detta enzym kan användas för matsmältningsarbetsflöden i lösning eller i gel för att producera peptider för identifiering av LC-MS/MS-protein.

Effektiv proteinnedbrytning kan slutföras på två timmar vid 37 °C. Lys-C-proteas förblir aktivt under starkt denaturerande förhållanden, såsom 8 M urea, 2 M guanidin-HCl, 1 % SDS, 2 % CHAPS och 40 % acetonitril, och fungerar väl vid pH 7 9 (–maximal aktivitet vid pH 8). Detta lyofiliserade enzym har en massa på 30 kDa och är stabilt i ett år när det lagras vid– 20 °C. Detta Lys-C-enzym är förpackat lyofiliserat (20μ g eller 100μ g kvantiteter).

Trypsin/Lys-C Protease Mix är en lyofiliserad blandning av trypsin och LysC-proteaser som har optimerats för att förbättra matsmältningseffektiviteten hos proteiner. Även om trypsin rutinmässigt används för proteinnedbrytning, är detta proteas ensamt inte tillräckligt för att fullständigt smälta proteiner vid karboxyländen av lysin- och argininrester. Därför kombineras Lys-C-proteas vanligtvis med trypsin för att sekventiellt smälta proteiner med färre missade klyvningar. Trypsin/Lys-C Protease Mix tillhandahålls i flexibla format om 20 stμ g, 5 x 20μ g eller 100μ g. Matsmältningen kan slutföras på så lite som 1,5 3 –timmar eller upp till över natten, beroende på förhållandet mellan enzym och protein.

Kymotrypsin, GluC, Asp-N-proteaser

• Ökad sekvenstäckning —bättre proteinkarakterisering är resultatet av överlappande peptider med komplementära kromatografiska, joniserings- och fragmenteringsegenskaper
• Hög specifik aktivitet —varje proteas har utmärkt enzymatisk specificitet
• Stabil —tillhandahålls i ett frystorkat format

Asp-N Protease är ett zinkmetalloproteinas av MS-grad som härrör från en mutant stam av Pseudomonas fragi och kräver en spårmängd zink för aktivitet. Asp-N-proteas klyver främst på aminosidan av aspartat och cysteinsyra som är ett resultat av cysteinoxidation. Klyvning kan också ske vid glutaminsyra; emellertid är klyvningshastigheten vid glutamylresten signifikant lägre än klyvningshastigheten vid asparaginsyraresten. Asp-N Protease kan effektivt smälta protein på –2 20 timmar vid °37 C med aktivitet större än 20 000 enheter/mg protein och förblir aktivt under denaturerande förhållanden, såsom 1 M urea, 2 M guanidin ·HCl, 0,1 % SDS, 2 % CHAPS, och 10 % acetonitri vid pHle, 6 % med optimal –aktivitet. Detta lyofiliserade enzym har en massa på 27 kDa och är stabilt i ett år när det lagras vid -20 °C.

Glu-C-proteas , även kallat V-8-proteas, är ett serinproteas av MS-kvalitet isolerat från Staphylococcus aureus. Glu-C Protease klyver specifikt karboxylsidan av glutaminsyrarester i ammoniumbikarbonat- och ammoniumacetatbuffertar, vilket genererar ett begränsat antal peptidfragment. Klyvning kan också ske vid både glutaminsyra och asparaginsyrarester i fosfatbuffertar. Glu-C Protease kan effektivt smälta protein på –5 18 timmar vid °37 C med aktivitet större än 500 enheter/mg protein och förblir aktivt under denaturerande förhållanden, såsom 2 M urea, 1 M guanidin HCl, ·0,1 % SDS, 2 % CHAPS och 20 % acetonitril. Glu-C-proteasaktivitet är optimal vid pH 8. Detta lyofiliserade enzym har en massa på 27 kDa och är stabilt i ett år när det lagras vid -20 °C.

Chymotrypsin Protease är ett MS-grade endoproteinas isolerat från bovin pankreas som specifikt spjälkar på karboxylsidan av tyrosin, fenylalanin, tryptofan och leucin. Två dominerande former av kymotrypsinproteas, A och B, finns i lika stora mängder i bovin pankreas. De är liknande proteiner (80 % homologi) men har olika proteolytiska egenskaper. Båda formerna av kymotrypsinproteas finns i Thermo Scientific Kymotrypsin proteas. Eftersom trypsin kan renas tillsammans med kymotrypsinproteas som härrör från naturliga källor, har Chymotrypsin Protease behandlats med TLCK för att eliminera potentiell tryptisk aktivitet, vilket förbättrar matsmältningsspecificiteten. Kymotrypsinproteas kan tolerera milda denaturerande tillstånd, såsom 0,1 % SDS, 2 M urea, 2 M guanidin HCl, 1 ·% CHAPS och 30 % acetonitril, med optimal aktivitet vid pH 7,5 8,–5. Detta lyofiliserade enzym har en massa på 25 kDa och är stabilt i ett år när det lagras vid -20 °C.