Thermo Scientific™ Poly(A)-polymeras, jäst

I jämförande studier fungerar jästpoly(A)-polymeras mer effektivt än E. coli poly(A)-polymeras för RNA-oligonukleotidmärkning och poly(A)-svansning. Kortare inkubationstider krävs för jästenzymet och det har visat sig märka både långa och korta substrat lika väl. Poly(A)-polymeras rekommenderas framför T4 RNA-ligas för 3'-ändsmärkning av långa RNA-molekyler.

*Observera: Olika modifierade nukleotider kan också användas för att märka 3'-änden av RNA med hjälp av jästpoly(A)-polymeras.

Renhet:

Fri från ribonukleases

Förvaringsbuffert:

20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM KCl, 0,5 mM DTT, 50 % glycerol.

Analysförhållanden:

2 5 mM Tris-HCl (pH 7,0), 40 mM KCl, 0,5 mM MnCl₂, 0,05 mM EDTA, 0,5 mM DTT, 0,2 mg/ml BSA, 10 % glycerol, 3,3 μM radiomärkt ATP, 0,5 mM ATP, 6,5 μg poly(A) (∼100 baser), poly(A) polymeras. Efter inkubation vid 37 °C i 10 minuter bestäms den syraolösliga radioaktiviteten.

Enhetsdefinition:

En enhet motsvarar 15 pmol/min AMP inkorporerad i (riboA)15 vid 37 °C.

Koncentration:

600 enheter/μl

Funktionellt test:

3'-ändad märkning av en ribonukleotid med cordycepin-5'-trifosfat.

Funktionellt testad 5X poly(A) polymerasreaktionsbuffert (1 ml inkluderad, PN 74226):

100 mM Tris-HCl, pH 7,0, 3,0 mM MnCl₂, 0,1 mM EDTA, 1mM DTT, 500 μg/ml acetylerad BSA, 50 % glycerol.

Användningsområden:

1. Tillägg av poly(A)-svansar till RNA.
2. Märkning av RNA:s 3'-ändar.

Källa:

E. coli-stammen innehåller en överproducerande klon av jästpoly(A)polymeras.