Läs mer
Invitrogen™ Poly(A) tail-Length Assay Kit
Beskrivning
Polyadenylering av eukaryota mRNA spelar en avgörande roll i RNA-metabolism, inklusive stabilitet, förbättrad translation, nukleär export och miRNA-medierad genreglering. Poly(A) Tail-Length Assay Kit låter dig snabbt mäta poly(A)-svansarna av flera mRNA på bara tre timmar. Detta kit använder en ny G/I-förlängningsteknik som bevarar 3'-änden av RNA och säkerställer exakt mätning av poly(A) svanslängd. Och alla reaktionskomponenter har optimerats så att du snabbt får kvalitetsdata.
Funktioner
- Mät poly(A)-svansen av flera RNA på under 3 timmar med hjälp av vanlig labbutrustning
- Noggrann mätning av poly(A) svanslängd jämfört med andra analyser
- Ett kit innehåller alla nödvändiga reagenser för 5 G/I tailing, 20 RT och 80 PCR-reaktioner
Teknologi
Poly(A) Tail-Length Assay Kit använder fyra nyckelsteg för att möjliggöra bestämning av poly(A) svanslängd (se figur).
- Steg —1 poly(A)-polymeras tillsätter ett begränsat antal guanosin- och inosinrester till 3'-ändarna av poly(A)-innehållande RNA.
- Steg 2 —omvandlas de svansade RNA:na till DNA genom omvänd transkription med användning av de nyligen tillsatta G/I-svansarna som primingsställen.
- Steg —3 PCR-amplifieringsprodukter genereras med användning av två primeruppsättningar. En genspecifik fram- och omvänd primeruppsättning utformad uppströms om polyadenyleringsstället (t.ex. 3'-UTR) produceras som en kontroll för genen av intresse. Den andra uppsättningen primrar använder den genspecifika framåt-primern och den universella omvända primern som medföljer kitet för att generera en produkt som inkluderar poly(A)-svansarna av genen av intresse.
- Steg —4 separeras PCR-produkterna på en agaros- eller polyakrylamidgel (se figur).
Utvalda referenser
- Parker, R. och Song, H. (2004) Nat Struct Mol Biol. 11 121-127.
- Brodersen, DE et al. (2008) Biochim Biophys Acta. 1779, 532-537.
- Wu, L., Fan J. och Belasco, JG (2006) Proc Natl Acad Sci USA . 103, 4034-4039.
- Izaurralde, E. et al. (2009) RNA 15, 21-32.
- Martin, G. och Keller, W. (1998) RNA 4, 226-230.
- Gauss-Müller, V. et al. (2001) Nucleic Acids Res. 29 E57-7
Specifikationer
Specifikationer
| Innehåll och lagring | Tillräckligt med reagens för 5 G/I tailing, 20 omvänd transkription och 80 PCR-reaktioner. HeLa Total RNA och Control Human Actin PCR Forward Primer för att verifiera komponenter och protokoll. Förvara reagenser vid -°15 C till -°30 C i en icke-frostfri frys. Förvara HeLa Total RNA vid -80 °C. |
| Frakt skick | Torr is |
| Polymeras | Poly(A) RNA-polymeras |
| För användning med (applikation) | Poly(A) svanslängdsdetektering |
| Utgångsmaterial | Totalt eukaryotiskt RNA (100 ng till 2μ g) |
| Kvantitet | 1 kit |
| Koncentration | 1,25 U/μ L |
Endast för forskning. Ej för diagnostik.
Din input är viktig för oss. Fyll i det här formuläret för att ge feedback relaterad till innehållet på denna produkt.