Invitrogen™ MAPK Pathway Panel (fosfo), 6plex

Panelen är validerad för användning med celllysater. För framställning av celllysater rekommenderar vi användning av antingen ProcartaPlex Cell Lysis Buffer (Cat. Nej. EPX-99999-000) eller cellutvinningsbuffert (Cat. Nej. FNN0011) tillskott med 0,5 M EDTA samt Halt Protease och fosfatashämmare enkel, för att använda Cocktail 100X (Kat. nr 78440 eller 78442). Dessa buffertar ingår inte i panelen. Beroende på ditt cellsystem kan andra buffertar också vara lämpliga.

Detta kit är kompatibelt med alla Luminex instrument. Om du använder ett xMAP INTELLIFLEX DR-SE-instrument rekommenderar vi vår ProcartaPlex Human MAPK Pathway Dual Reporter Panel 2x6plex (Cat. Nej. EPX060-97217-DR), vilket möjliggör samtidig kvantifiering av total- och fosforylerade proteiner på samma kula i en enda brunn.

Panelen levereras i ett färdigt format med individuella ampuller av fångst- och detektionsreagenser formulerade i 1X koncentration, vilket kräver mindre pipettering och experimentell installation.

ProcartaPlex Förkonfigurerade paneler testas noggrant för analytkombination, interferens och korsreaktivitet för att ge högsta nivå av validering och precision. Alla ProcartaPlex paneler förses med nödvändiga reagenser för att utföra analysen.

Mål [pärlregion]: JNK1/3[pT183/pT221] [13], s. 38[pT180/pY182] [14], FAK[pY397] [30], c-Myc[pS62] [53], ERK1[pT202/pY204] [62], MEK1[pS218/pS222] [63]

Om ProcartaPlex tester för plattformen Luminex

ProcartaPlex Immunoassays bygger på principerna för en sandwich ELISA, där två mycket specifika antikroppar binder till olika epitoper av ett protein för att kvantifiera alla proteinmål samtidigt med ett Luminex instrument. ProcartaPlex Multiplexanalyser kräver så lite som 25 μl plasma eller serum, eller 50 μl cellkulturöverlagring, och bara fyra timmar för att få analyserade resultat.

• Fler resultat per prov – mät flera proteinmål samtidigt i ett enda 25 till 50 μl prov
• Väletablerad Luminex teknik – högt refererad multiplexeringsplattform för proteindetektion och kvantifiering

ProcartaPlex analyser använder Luminex xMAP (multianalytprofilering) teknik för samtidig detektion och kvantifiering av upp till 80 proteinmål i ett enda 25 till 50 μl prov från plasma, serum, cellkulturöverlagringar och andra kroppsvätskor.

Pärlorna i analysen färgas internt med exakta proportioner av röda och infraröda fluoroforer för att skapa spektralt unika signaturer som kan identifieras av Luminex xMAP detektionssystemen (t.ex. Luminex 200, FLEXMAP 3D, och MAGPIX).ProcartaPlex Luminex Liknande en smörgås ELISA ProcartaPlex använder analysen matchade antikroppspar för att identifiera det proteinet som är av intresse. I en multiplexad analys märks varje spektralt unik kula med antikroppar specifika för ett enda målprotein, och bundna proteiner identifieras med biotinylerade antikroppar och streptavidin mot R-fykoerytrin (RPE). Konjugationen av proteinspecifika antikroppar till en distinkt kula möjliggör analys av flera mål i en enda brunn.

Den mest betydande skillnaden mellan ett ProcartaPlex test och ELISA är att fångstantikroppen i ProcartaPlex analysen är konjugerad till en pärla och inte adsorberad till mikroplattans brunn, så assay-reagenserna ProcartaPlex flyter fritt i lösningen. För detektion innehåller instrumentet Luminex 200 till exempel två lasrar, en för att särskilja spektralsignaturen för varje kula och en annan för att kvantifiera mängden RPE-fluorescens, som är proportionell mot mängden protein i provet. ProcartaPlex Multiplexanalyser kan profilera fler målproteiner med betydligt mindre prov på samma tid som det tar att utföra en traditionell smörgås ELISA.