Gibco™ PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit

Satsen är ett trestegssystem som används under 35 dagar, med komponenter som läggs till sekventiellt för att specificera PSCs till mellanhjärnans bottenplatta, expandera golvplattans stamceller och differentiera golvplattans stamceller till funktionella dopaminerga nervceller i mitthjärnan. Varje komponent är prestandatestad för att säkerställa generering av den korrekta fenotypen, och mellanhjärnans dopaminerga neuroner har funktionstestats för förmågan att producera spontan aktionspotential och frisättning av dopamin vid depolarisering.

Steg 1: Specifikation av PSC:er i mellanhjärnans golvplatteceller
Under utveckling av centrala nervsystemet härleds mellanhjärnans dopaminerga neuroner från en distinkt population av celler som kallas mellanhjärnans golvplatteceller, som bildas under dagarna 21 28 –av graviditeten och ligger längs den ventrala mittlinjen av det utvecklande neuralröret. Nya rapporter har fokuserat på vikten av att differentiera hPSCs till celler från denna region, snarare än att använda en mer generisk neurala stamcellspopulation, för att skapa autentiska dopaminerga nervceller i mitthjärnan. Det första steget i skapandet av dopaminerga neuroner med PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit är specifikationen av hPSCs i mellanhjärnan-specificerade golvplatte-progenitor-celler (FP) i komplett Floor Plate Specification Medium.

Steg 2: Skapa en bankbar population av stamceller från golvplattor Standardmetoder för att
skapa dopaminerga nervceller i mitthjärnan involverar långa protokoll som är kontinuerliga och inte skalbara. Med PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit skapas en fungerande bank av stamceller från golvplattor som upprätthåller mellanhjärnans identitet.

Möjligheten att samla stamceller i detta steg möjliggör:
• En signifikant ökning av resulterande DA-neuronrenhet
• Förmågan att skala experiment bortom nuvarande gränser
• Möjligheten att fördela celler mellan kamrater eller tina upp för senare användning Steg

3: Differentiering av golvplatteprekursorceller till mellanhjärnans dopaminerga neuroner Det
sista steget i PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit-protokollet involverar differentiering av golvplattans stamceller till mellanhjärnans dopaminerga neuroner. Dopaminerga neuroner som genereras under detta steg har visat sig bibehålla identiteten i mitthjärnan, uppvisa en genuttrycksprofil som är likvärdig med den hos neuroner som genereras med användning av publicerade protokoll, och uppvisar funktionalitet som visas genom spontan aktionspotential och frisättning av dopamin vid depolarisering.