Thermo Scientific™ RiboLock RNas-hämmare (40 U/μ L)

• Hämmar inte eukaryota RNas T1, T2, U1, U2, CL3 eller prokaryota RNas I och H
• Fungerar under flera olika reaktionsförhållanden
• Skyddar RNA från nedbrytning vid temperaturer upp till 55°C

Kvalitetskontroll:

• Frånvaron av ribonukleaser, endo-, exodeoxiribonukleaser och fosfataser och ribonukleaser bekräftade av lämpliga kvalitetstester
• Funktionstestad i RNA- och cDNA-syntes

Källa:

• E.coli-celler med en klonad gen som kodar för däggdjursribonukleasinhibitor

Molekylvikt:

• 49,6 kDa monomer Definition av aktivitetsenhet:
  • En enhet av RiboLock RNas-inhibitor hämmar aktiviteten av 5 ng RNas A med 50 %
  • Inhibitoraktivitet analyseras i följande blandning: 100 mM Tris-HCl (pH 7,5), 1,2 mM EDTA, 0,1 mg/ml BSA, 100 ng/ml RNas A, 0,1 mg/ml [ ³H]-RNA, 50 mg/ml jäst-RNA 8 mM DTT
• Förvaringsbuffert:
  • Enzymet tillhandahålls i: 20 mM HEPES-NaOH (pH 7,5), 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 0,5 mM ELUGENT-rengöringsmedel och 50 % (v/v) glycerol
• Inhibition och inaktivering
  • Inhibitorer: vanliga denatureringsmedel (SDS, urea och alla oxiderande reagenser (p-klorkvicksilverbensoat, upplöst syre, joner i deras högre oxidationstillstånd) hämmar kraftigt RiboLock RNas-inhibitor och frisätter det bundna RNas
  • Inaktiveras genom uppvärmning vid 75°C i 10 min. Återstående aktivitet kan detekteras efter uppvärmning till 70 i 10 min.°

Rekommenderas för:

• Hämning av RNA-nedbrytning i följande: in vitrotranskription (1), cDNA-syntes (2), in vitro överföring (3), isolering av däggdjurscellfraktioner som innehåller mRNA-proteinkomplex
• RNA-rening och förvaring
• Separation och identifiering av specifika ribonukleasaktiviteter
• Studier av tumörsuppression

Anmärkning:

• DTT som finns i förvaringsbufferten säkerställer stabilitet under långtidsförvaring, men är inte nödvändigt för hämmande aktivitet
• Rekommenderad koncentration 1u/μl av en reaktionsblandning