Thermo scientific™ Sekventiellt protein/DNA/RNA-extraktionskit

Funktioner i det sekventiella protein-/DNA/RNA-extraktionskitet inkluderar:

• Hög känslighet—stödjer skalbara extraktioner från värdefulla eller låga provvolymer ner till 1 000 celler eller 0,005 mg vävnad (vävnadsberoende)
• Direkt kompatibilitetsutvunna—analyter ner till 100 000 celler eller 1–2 mg vävnad är validerade och lämpliga för masspektrometri och tillämpningar NGS
• Automatiserad höggenomströmning—kompatibel med KingFisher-instrument för skalbar bearbetning
• Förbättrad reproducerbarhetsstandardiserad—protokoll minskar variationen

Kitet använder en pärlbaserad sekventiell extraktionsmetodik som använder proteinisolering före nukleinsyraextraktion, vilket resulterar i förbättrade proteinutbetalningar som är direkt kompatibla med masspektrometrianalys. Denna metod gör det möjligt för forskare att erhålla analyter lämpliga för olika nedströmsapplikationer, inklusive SDS-PAGE, western blotting, masspektrometri, sekvensering, genotypning och qPCR från provindata så små som 1–2 mg vävnad eller 100 000 celler, samtidigt som kvalitetsstandarderna som krävs för både nästa generations sekvensering (NGS) och MS-plattformar upprätthålls. MagMAX Dynabeads :s magnetpärlbaserade reningsteknik möjliggör hög reproducerbarhet och skalbar, höggenomströmningsbearbetning när den integreras med automationssystem som KingFisher Sample Purification System.

Detta kit kombinerar fördelarna med multi-analytextraktion med den precision och effektivitet som krävs för avancerade proteomik- och genomikarbetsflöden, vilket gör det särskilt värdefullt för multi-omics-studier där provkonservering och analytisk omfattande kvalitet är avgörande.

Verifierad prestanda

Kitet hjälper till att leverera utbytes- och kvalitetsmått jämförbara med standardextraktionskit för en enda analyt, vilket möjliggör effektiv multianalytåtervinning från ett enda prov. Medan de flesta kommersiella sekventiella protokoll är optimerade för stora provvolymer (t.ex. 1 miljon celler eller 10 –stycken 20 mg vävnad), erbjuder detta kit exceptionell mångsidighet över ett bredare område. Validerad för 100 000 celler och 12 –mg vävnad har den också framgångsrikt använts med så få som 1 000 celler och 5 μg vävnad samtidigt som linjära utbyten bibehålls och nukleinsyrans integritet bevaras lämplig för qPCR-analys. Detta breda dynamiska omfång ger större flexibilitet och möjliggör effektiv bearbetning av värdefulla eller begränsade prover som är svåra att analysera med konventionella metoder.

Strömlinjeformad trestegs sekventiell extraktion

Extraktionsproceduren följer en systematisk trestegsprocess utformad för att stödja en hög återhämtning av varje biomolekylklass. Inledningsvis Dynabeads introduceras proteinkulor till det lyserade provet och inkuberas för att underlätta proteinbindning, varefter de överförs till ett separat rör för tvätt och proteinbearbetning som är kompatibelt med nedströms western blot- eller masspektrometriapplikationer. Därefter tillsätts MagMAX DNA/RNA-BINDANDE KULOR till det ursprungliga röret, som nu är utarmat på proteiner, för att möjliggöra DNA-bindning och extraktion med hjälp av proprietära buffertformuleringar innan överföring till ett nytt rör för vidare förberedelse. Slutligen introduceras MagMAX DNA/RNA-BINDANDE KULOR IGEN I DET URSPRUNGLIGA RÖRET, SOM NU ÄR UTTÖMT PÅ BÅDE PROTEINER OCH DNA, FÖR ATT UNDERLÄTTA RNA-BINDNING OCH EXTRAKTION MED HJÄLP AV SPECIALISERADE PROPRIETÄRA BUFFERTAR OCH LÖSNINGAR, MED EFTERFÖLJANDE ÖVERFÖRING TILL ETT DEDIKERAT RÖR FÖR SLUTLIG FÖRBEREDELSE. De resulterande extraherade proteinerna är lämpliga för WB- eller MS-analys, medan det återvunna DNA och RNA är kompatibla med kvantitativ PCR (qPCR) och nästa generations sekvensering (NGS) applikationer.