Thermo Scientific™ SILAC Proteinkvantifieringskit (LysC), RPMI 1640

Thermo Scientific SILAC Proteinkvantifieringskit– RPMI 1640 används för specifik analys av proteinuttryck genom masspektrometri med användning av stabil isotopmärkning med aminosyror i cellkultur (SILAC ).

Stabil isotopmärkning med aminosyror i cellkultur (SILAC ) är en kraftfull metod för att identifiera och kvantifiera relativa differentiella förändringar i komplexa proteinprover. Detta tillvägagångssätt innebär in vivo metabolisk inkorporering av“ tung” 13C- eller 15N-märkta aminosyror till proteiner följt av masspektrometri (MS) för accelererad och omfattande identifiering, karakterisering och kvantifiering av proteiner.

Eftersom peptider märkta med tunga och lätta aminosyror är kemiskt identiska, samelueras de under omvänd fas kolonnförfraktionering och detekteras därför samtidigt under MS-analys. De relativa toppintensiteterna för flera isotopiskt distinkta peptider från varje protein används sedan för att bestämma den genomsnittliga förändringen i proteinmängd i det behandlade provet.

Varje kit innehåller alla nödvändiga reagenser för att isotopiskt märka celler med 13C6 L-lysin-2HCl, inklusive media, tunga och lätta aminosyror och dialyserat serum. Tunga L-arginin-HCl-derivat (artikelnr. 88210, 89990) finns tillgängliga separat och kan kombineras med Pierce SILAC Proteinkvantifieringssatser för att förbättra täckningen av peptidisotopetiketter. Kit är kompatibla med däggdjurscellinjer anpassade att växa i antingen DMEM eller RPMI 1640 media. Kit med specialiserade mediaformuleringar finns också tillgängliga för mänskliga och murina stamcellinjer. I kombination med Thermo Scientific Anrikningsprodukter för protein/peptidprov, Pierce SILAC Proteinkvantifieringskit möjliggör även MS-analys av proteiner med låg förekomst som cellyteproteiner, organellspecifika proteiner och posttranslationella proteinmodifieringar som fosforylering eller glykosylering.

Rekommenderas för: Kvantitativ analys av relativa förändringar i proteinmängd från olika cellbehandlingar; Kvantitativ analys av proteiner för vilka det inte finns några tillgängliga antikroppar; Proteinuttrycksprofilering av normala vs sjukdomsceller; Identifiering och kvantifiering av hundratals till tusentals proteiner i ett enda experiment

• Effektiv —100% märkningsintegrering i proteiner från levande celler
• Reproducerbar —eliminerar intra-experimentell variabilitet orsakad av differentiell provberedning
• Flexibla —medier som saknar både L-lysin och L-arginin, vilket möjliggör mer fullständig proteomtäckning genom dubbel aminosyraisotopmärkning
• Kompatibla —märkningsproteiner uttryckta i en mängd olika däggdjurscellinjer anpassade att växa i RPMI 1640-medium, inklusive HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat och andra
• Högkvalitativa kompletterar —tunga aminosyror med> 99 % isotoprenhet; dialyserad FBS testad för att säkerställa att den är steril, endotoxinfri och cellkulturkompatibel