Invitrogen™ SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix för qRT-PCR

SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix för qRT-PCR ger högtemperaturkapaciteten hos SuperScript III Reverse Transcriptase i ett optimerat SuperMix-format för syntes av första-strängs cDNA för användning i realtids kvantitativ RT-PCR (qRT-PCR). Den enkla, tidsbesparande reaktionsuppsättningen använder bara två rör: en 2X reaktionsblandning och en enzymblandning.

Enzymmix SuperScript III Reverse
Transcriptase , som ingår i RT-enzymmixen, är en version av M-MLV RT som har konstruerats för att minska RNase H-aktivitet och ge ökad termisk stabilitet. Enzymet kan användas för att syntetisera cDNA vid ett temperaturområde av 42 –60 °C, vilket ger ökad specificitet, högre utbyten av cDNA och mer fullängdsprodukt än andra omvända transkriptaser. Eftersom SuperScript III RT inte signifikant hämmas av ribosomalt och överförings-RNA, kan det användas för att syntetisera cDNA från totalt RNA. RNaseOUT Rekombinant ribonukleasinhibitor, som också ingår i enzymblandningen, är ett RNas-hämmande protein som skyddar mot nedbrytning av mål-RNA på grund av ribonukleaskontamination av RNA-preparatet.

Reaktionsblandning
2X RT-reaktionsblandningen inkluderar oligo(dT) ₂₀ , slumpmässiga hexamerer, _MgCl2 och dNTPs i en buffertformulering som har optimerats för qRT-PCR. E. coli RNase H tillhandahålls som ett separat rör i satsen för att ta bort RNA-mallen från cDNA:RNA-hybridmolekylen efter första-strängssyntes. Detta har visat sig öka känsligheten i qRT-PCR.

Använda SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix
Denna SuperMix-formulering kan användas för att kvantifiera färre än 10 kopior av en målgen i qRT-PCR, med ett brett dynamiskt område som stöder noggrann kvantifiering av högkopierat mRNA från upp till 1μ g av totalt RNA. Reagenser tillhandahålls för 50 eller 250 RT-reaktioner på 20μ L vardera.