Invitrogen™ SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix för qRT-PCR

Enzymblandning
SuperScript III Reverse Transcriptase, som ingår i RT-enzymblandningen, är en version av M-MLV RT som har konstruerats för att minska RNas-H-aktiviteten och ge ökad termisk stabilitet. Enzymet kan användas för att syntetisera cDNA vid ett temperaturintervall på 42 ––60 °C, vilket ger ökad specificitet, högre avkastning av cDNA och mer fulllängdsprodukt än andra omvända transkriptaser. Eftersom SuperScript III RT inte hämmas signifikant av ribosomalt och transfer-RNA kan det användas för att syntetisera cDNA från totalt RNA. RNaseOUT Rekombinant ribonuklessämmare, som också ingår i enzymblandningen, är ett RNas-inhibitorprotein som skyddar mot nedbrytning av mål-RNA på grund av ribonuklessororering av RNA-preparatet.

Reaktionsmix
2X RT-reaktionsblandningen inkluderar oligo(dT)₂₀, slumpmässiga hexamerer, MgCl₂ och dNTP:er i en buffertformulering som har optimerats för qRT-PCR. E. coli RNase H tillhandahålls som ett separat rör i kitet för att ta bort RNA-mallen från cDNA:RNA-hybridmolekylen efter förstasträngssyntes. Detta har visat sig öka känsligheten i qRT-PCR.

Användning SuperScript av III First-Strand Synthesis SuperMix
Denna SuperMix-formulering kan användas för att kvantifiera färre än 10 kopior av en målgen i qRT-PCR, med ett brett dynamiskt område som stöder noggrann kvantifiering av högkopia mRNA från upp till 1 μg totalt RNA. Reagenser tillhandahålls för 50 eller 250 RT-reaktioner om 20 μl vardera.