Invitrogen™ SuperScript™ IV Syntessystem för första strängen

Beskrivning

SuperScript IV First-Strand Synthesis-system för RT-PCR, tillgängligt med eller utan ezDNas, är optimerat för syntes av första-strängs-cDNA från renat poly(A)+ eller totalt RNA. Systemet inkluderar SuperScript IV omvänt transkriptas (RT), en patenterad MMLV-mutant som producerar robust och pålitlig cDNA-syntes i RT-reaktioner. SuperScript IV First-Strand Synthesis-system med ezDNase har en ytterligare förmåga att ta bort potentiell genomisk DNA-kontamination.

SuperScript IV-syntessystemet är avsevärt förbättrat jämfört med det SuperScript III-baserade systemet vad gäller inhibitorresistens, processivitet och reaktionshastighet, samtidigt som alla fördelar med det tidigare systemet bibehålls, inklusive ökad termostabilitet, mycket effektiv full längds cDNA-syntes och minskat RNas aktivitet. SuperScript IV-system är designat för att ge tillförlitlig, konsekvent och snabb cDNA-syntes i närvaro av inhibitorer som finns i en mängd olika prover och som gör att andra tillgängliga RT:er fungerar ineffektivt.

Det extremt förenklade genomiska DNA- borttagningssteget i SuperScript IV First-Strand Synthesis-system med ezDNase minskar dramatiskt tiden för hela omvänd transkriptionsprotokollet och minskar möjlig variation i genuttryck på grund av RNA-förlust eller skada under konventionell DNas-behandling. SuperScript IV-syntes-system med ezDNase är det bästa valet för prestanda och flexibilitet för RT-PCR-tillämpningar. Vi rekommenderar det för alla RT-PCR-tillämpningar, särskilt när reproducerbarhet och tillförlitlighet är det primära problemet och när hämmare i RNA-provet kan störa cDNA-syntesen, vilket leder till bias i genuttrycksstudier.

Båda SuperScript IV First-Strand Synthesis-systemen innehåller alla komponenter som behövs för RT-reaktioner, plus en extra kontrollgen och primers, och ger flexibiliteten att anpassa RT-uppsättningen för att passa behoven i din tillämpning.

Funktioner i SuperScript IV First-Strand Synthesis-system inkluderar:

• Betydligt förbättrad resistens mot en mängd olika inhibitorer som kan störa cDNA-syntesen
• Robust och specifik cDNA-syntes i ett brett spektrum av provtyper
• En snabbare omvänd transkriptasreaktion som minskar inkubationstiden från> 50 min till 10 min
• Betydligt bättre processivitet jämfört med SuperScript III RT
• Förenklat steg för borttagning av genomiskt DNA (SuperScript IV-syntessystem med endast ezDNase)

Enzymkälla
Renad från E. coli som uttrycker M-MLV:s pol-gen, modifierad för att öka termostabilitet, halveringstid, processivitet och inhibitorresistens och för att minska RNas H-aktivitet.

Prestanda- och kvalitetstestning
Endodeoxiribonukleas-, exodeoxiribonukleas- och ribonukleasanalyser; och utbyte och längd av cDNA-produkt

Enhetsdefinition
En enhet av SuperScript IV RT är mängden enzym som krävs för att införliva 1 nmol deoxiribonukleotid i syrautfällbart material på 10 minuter vid 37°C med användning av poly(A) oligo(dT) _12–18 som mall/primer.

Enhetsreaktionsbetingelser
50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM _MgCl2 , 10 mM DTT, 50 mM KCl, 0,5 mM dTTP, 0,4 MBq/ml [ ^3H ]-dTTP, 0,4 mM poly(A) oligo (dT) ) _12-18 och enzym i 20μ L i 10 min vid 37°C