Invitrogen™ SYTO™ Gröna fluorescerande nukleinsyrafläckar

SYTO Gröna fluorescerande nukleinsyrafärgningar är cellpermeant nukleinsyrafärgningar som visar en stor fluorescensförstärkning vid bindning av nukleinsyror. Färgämnena SYTO kan användas för att färga RNA och DNA i både levande och döda eukaryota celler, samt i grampositiva och gramnegativa bakterier.

Fläckarna SYTO delar flera viktiga egenskaper:

• Permeabilitet för praktiskt taget alla cellmembran, inklusive däggdjursceller och bakterier
• Hög molarabsorption, med extinktionskoefficienter >50 000 ^{cm-1 M-1} vid synliga absorptionsmaxima
• Extremt låg intrinsisk fluorescens, med kvantgivningar vanligtvis <0,01 när den inte är bunden till nukleinsyror
• Kvantmat ger vanligtvis >0,4 när det binds till nukleinsyror.

SYTO Grön-fluorescerande nukleinsyrafärgningar excitation/emissionsvåglängder

• SYTO 9—RNA 486/501 nm; DNA 485/498 nm
• SYTO 11—RNA 510/530 nm; DNA 508/527 nm
• SYTO 12—RNA 500/519 nm; DNA 499/522 nm
• SYTO 13—RNA 491/514 nm; DNA 488/509 nm
• SYTO 14—RNA 521/547 nm; DNA 517/549 nm
• SYTO 16—RNA 494/525 nm; DNA 488/518 nm
• SYTO 21—DNA 494/517 nm
• SYTO 24—DNA 490/515 nm
• SYTO BC—RNA 487/504 nm; DNA 485/500 nm
• SYTO RNASelect—RNA 490/530 nm

SYTO färgämnen skiljer sig från varandra i en eller flera egenskaper, inklusive cellpermeabilitet, fluorescensförstärkning vid bindning av nukleinsyror, excitations- och emissionsspektra, DNA/RNA-selektivitet och bindningsaffinitet. Färgämnena SYTO är kompatibla med en rad fluorescensbaserade instrument som använder laserexcitation eller en konventionell bredbandsbelysning (t.ex. kvicksilver- och xenonbåglampor). Filterset som är lämpliga för avbildningsceller märkta med fluorescein (FITC), Alexa Fluor 488 eller GFP fungerar väl för avbildningsceller färgade med SYTO gröna nukleinsyrafärgningar.

SYTO Nukleinsyrafärgningar har använts i olika tillämpningar, från färgning av DNA som fläckats på mikroarrayer till färgning av levande och fixerade celler. Färgämnena SYTO fungerar inte uteslutande som nukleära färgämnen i levande celler och bör inte likställas med DNA-selektiva föreningar såsom DAPI (Kat. nr D1306, D21490) eller Hoechst 33342 (Kat. nr H1399, H3570), som färgar kärnor i levande djurceller. Eukaryota celler inkuberade med SYTO färgämnen uppvisar generellt cytoplasmatisk eller mitokondriefärgning, samt kärnfärgning. De SYTO gröna fluorescerande nukleinsyrafärgningarna har visat sig värdefulla i en rad forskningstillämpningar samt används inom flödescytometri och fluorescensmikroskopi.

Specifika färgningsapplikationer för vissa av de SYTO gröna fluorescerande nukleinsyrafärgningarna

9-färgningen SYTO har visat sig färga levande och döda grampositiva och gramnegativa bakterier. Det är en komponent i bakteriella LIVE/DEAD BacLight livskraftskit (Kat. nr L7007, L7012, L13152).

Den SYTO 11 fläcken (Kat. Nej. S7573) har använts tillsammans med timelapse-mikroskopi för att undersöka klyvningsorienteringen hos delande celler i den utvecklande hjärnbarken.

Den 13:e fläcken SYTO (Kat. Nej. S7575) har använts i kombination med propidiumjodid (Cat. Nos. P1304, P3566) för att övervaka glutamatinducerad nekros i cerebellära granulceller.

14-färgen SYTO (Kat. Nej. S7576) binder till cytoplasmatisk RNA, vilket möjliggör dess användning för att spåra RNA-granultransport i levande neuroner.

Flera rapporter beskriver användningen av SYTO färgämnen för att upptäcka apoptos. En serie SYTO nukleinsyrafärgningar screenades för förmågan att skilja mellan apoptotiska och icke-apoptotiska musthymocyter, och 16-färgningen SYTO (Cat. nr. S7578) visade sig vara optimal för detta ändamål. 16-färgningen SYTO har också använts tillsammans med propidiumjodid för att särskilja levande och döda COS-7-celler med en laserbaserad skanningscytometer.

SYTO BC Green Fluorescent Nucleic Acid Stain är en blandning av några av våra bästa SYTO färgämnen för bakteriell färgning och ingår i Bacteria Counting Kit (Cat. Nej. B7277) för bakterieräkning i flödescytometri.

Den SYTO RNASelect gröna fluorescerande cellfärgningen är en cellpermeant nukleinsyrafärgning som selektivt färgar RNA. Även om färgningen är i princip icke-fluorescerande i frånvaro av nukleinsyror, uppvisar den ljusgrön fluorescens när den SYTO RNASelect binds till RNA (absorption/emission maximal ∼490/530 nm), men endast en svag fluorescerande signal när den binds till DNA. Den har använts för att färga RNA-last i exosomer i både levande cellprover och isolerade exosomer.

SYTO Grön fluorescerande nukleinsyra färgprovningskit

SYTO Green Fluorescent Nucleic Acid Stain Sampler Kit #1 innehåller vår samling av cellpermeanta, grönfluorescerande SYTO nukleinsyrafärgningar. Eftersom färgämnena kan uppvisa olika färgningsbeteenden med olika vävnader och celler kan det vara nödvändigt att testa färgämnena för att hitta det optimala färgämnet för en specifik applikation. Kitet innehåller 50 μl vardera med SYTO 11 –, 14, 16, 21, 24 och 25 färgämnen.

Vilken fysiologisk buffert som helst mellan pH 7,0 –och 8,0, inklusive PBS, kan användas för att späda SYTO ut färgämnena till färgningslösningen.