Läs mer
Beskrivning
Katalysera bildandet av en fosfodiesterbindning mellan intill varandra liggande 5'-fosfat- och 3'-hydroxylterminaler i duplex-DNA eller RNA med Thermo Scientific™ T4 DNA-ligas. Enzymet reparerar enkelsträngade hack i duplex-DNA, RNA eller DNA/RNA-hybrider. Den förenar också DNA-fragment med antingen kohesiva eller trubbiga ändar, men har ingen aktivitet på enkelsträngade nukleinsyror.
De T4 DNA Ligas kräver ATP som en kofaktor.
Höjdpunkter
- Aktiv i Themo Scientific restriktionsenzym, PCR och RT-buffertar (när de kompletteras med ATP )
- Snabb– klibbiga ände ligering fullbordas på 10 minuter vid rumstemperatur
- Levereras med PEG-lösning för effektiv ligering med trubbiga ändar
Användningsområden
- Kloning av restriktionsenzymgenererade DNA-fragment
- Kloning av PCR-produkter
- Sammanfogning av dubbelsträngade oligonukleotidlinkrar eller adaptrar till DNA
- Platsstyrd mutagenes
- Amplifierad fragmentlängd polymorfism (AFLP )
- Ligasmedierad RNA-detektion ( se referens 3)
- Nick-reparation i duplex-DNA, RNA eller DNA/RNA-hybrider
- Självcirkularisering av linjärt DNA.
Anteckningar
- Bindning av T4 DNA-ligas till DNA kan resultera i ett bandskifte i agarosgeler. För att undvika detta, inkubera prover med 6X DNA Loading Dye& SDS- lösning vid °70 C i 5 minuter eller °65 C i 10 minuter och kyl på is före elektrofores.
- Volymen av ligeringsreaktionsblandningen bör inte överstiga 10 % av den kompetenta cellvolymen i transformationsprocessen.
- Före elektrotransformation, ta bort T4 DNA Ligas från ligeringsblandningen genom spinnkolonn eller kloroformextraktion. Det extraherade DNA:t kan fällas ut ytterligare med etanol.
Specifikationer
Specifikationer
| Koncentration | 5 U/μ l |
| Enzym | DNA-ligas |
| Kompatibel buffert | 10X T4 DNA-ligasbuffert |
| Kvantitet | 5 x 1 000 enheter |
| Produkttyp | T4 DNA-ligas |
Säkerhet och hantering
- T4 DNA Ligase (5 U/µL)
- Varning
- Allvarlig ögonskada/ögonirritation Kategorija 2
- H319-Orsakar allvarlig ögonirritation.
- P264-Tvätta grundligt efter användning.
- P280-Använd skyddshandskar/skyddskläder/ögonskydd/ansiktsskydd.
- P305+P351+P338-VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja.
- P337+P313-Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp.
- MIXTURE LIST-Contain: (R*,R*)-1,4-dimercapto-2,3-butanediol
Endast för forskning. Ej för diagnostik.
Genom att klicka på Skicka bekräftar du att du kan bli kontaktad av Fisher Scientific angående feedbacken du har lämnat i detta formulär. Vi kommer inte att dela din information för andra ändamål. All kontaktinformation som tillhandahålls ska också underhållas i enlighet med vår Sekretesspolicy.