Thermo Scientific™ CpG-metylerat Jurkat genomiskt DNA

Genomiskt DNA isolerades från Jurkat E6.1 (human akut T-cellsleukemi, klon E6.1) celler odlade till konfluens i RPMI media kompletterat med 10 % bovint fetalt serum. Isolerat genomiskt DNA behandlades med CpG-metyltransferas, renades på nytt och löstes i TE-buffert. ≥98 % CpG-metyleringsnivå bekräftad genom bisulfitsekvensering.

Thermo Scientific CpG Methylated Jurkat Genomic DNA är humant manligt genomiskt DNA från Jurkat-celler, enzymatiskt metylerat med CpG Methyltransferase (M.SssI). Genomiskt DNA isolerades från Jurkat-celler (human akut T-cellsleukemi) odlade till konfluens i RPMI-media kompletterat med 10 % bovint fosterserum. Isolerat genomiskt DNA behandlades med CpG-metyltransferas, renades på nytt och löstes i TE-buffert. ≥98 % CpG-metyleringsnivå bekräftad genom bisulfitsekvensering.

Höjdpunkter:
•Ren - DNA fritt från hämmare, proteiner och RNA
•Bekväm - färdig att använda 100 ng/μ L-koncentration
•Kompatibel med nedströmsapplikationer
•Fullständig metylering av cytosiner i CpG-dinukleotider

Applikationer
Som kontroller i följande:
• Bisulfitsekvensering
• Kombinerad bisulfitrestriktionsanalys (COBRA)
• Metyleringskänslig Single-Nucleotid Primer Extension (Ms-SNuPE)
• A260/230-förhållande:≥ 2
• A260/280-förhållande:1,75 till

1,98 Kvalitetskontroll
• Dominerande> 30 kb-band observeras under agarosgelelektrofores. DNA-koncentrationen bestäms spektrofotometriskt. Frånvaron av nukleaser bekräftas av märkta oligonukleotidtester.
• CpG-metylerat DNA skyddades från nedbrytning av det metyleringskänsliga restriktionsenzymet HpaII, vilket bestämts genom qPCR-analys. Efter qPCR observeras ekvivalenta Cq-värden för HpaII-digererat och kontroll-osmält DNA.
• DNA-renheten bekräftas genom ett funktionellt qPCR-test där Cq-värdena för MspI- och HpaII-digererat mall-DNA måste skilja sig med≥ 5 cykler.
• Frånvaron av mykoplasma-DNA bekräftas med PCR.
• Som kontroller i bisulfitsekvensering, kombinerad bisulfitrestriktionsanalys (COBRA), metyleringskänslig Single-Nucleotide Primer Extension (Ms-SNuPE)