Thermo Scientific™ MuA Transposase

Mutationsgenerationen System™ Kit (MGS™ Kit) är designad för snabb konstruktion av insertionsmutationsbibliotek för alla typer av DNA-kloner. Systemet använder det mycket effektiva transpositionsmaskineriet för bakteriofagen Mu för att generera en pool av 15 bp insertionsmutanter som kan användas i en mängd olika funktionella analyser av de kodade proteinerna eller regulatoriska DNA-regioner.

Thermo Scientific transposonprodukter är baserade på transponeringsmaskineriet för bakteriofagen Mu. Under den lytiska fasen av fagens livscykel replikerar maskineriet dess genom genom att upprepade gånger transponera inuti värdgenomet. Mu-transpositionsreaktionen har modifierats till en in vitro -reaktion katalyserad av ett enda enzym - MuA-transposas . I detta system är en in vitro -reaktion kapabel att generera mer än en miljon transposoninsättningskloner.

Drag
Mutationsgenereringssystemet (MGS Kit) och Stop Generation System (STOP Kit) utvecklades för funktionell analys av proteiner. Dessa nya transposonverktyg möjliggör skapandet av mättade bibliotek av muterade proteiner i en enda reaktion med mindre praktisk tid än någon annan metod. Platsen för transposoninsättningen i varje muterad klon kan kartläggas genom antingen PCR eller sekvensering. Med MGS och STOP-kit, tusentals muterade kloner är redo för expressionsstudier på bara 2 till 3 dagar.

De MGS Satsen innehåller den kompletta uppsättningen reagenser för transposonbaserad linkerskanningsmutagenes av valfritt målprotein. De MGS Entranceposons är designade för att göra subtila förändringar i strukturen av ett målprotein genom att infoga 15 bp in-frame-linkers genom hela motsvarande målgen. Denna in-frame-insättning möjliggör konservering av nedströmssekvenser.

STOPKit Entranceposons innehåller translationella stoppkodoner i alla tre läsramar inom den terminala delen av transposonsekvensen. Den proprietära modifieringen av Stop Generation System gör det möjligt att generera ett mättat C-terminalt deletionsbibliotek från praktiskt taget vilket målprotein som helst med en maximal tillsats av tre aminosyror.

Höjdpunkter

• Effektiv - Skapa mättade insättningsbibliotek för sekvensering och proteinanalys i en enda reaktion
• Snabbt - Minska praktiska tid jämfört med konventionella metoder
• Slumpmässig - Eliminera målplatspreferens eller infogning av hotspot

• Enzymer
• Receptorer
• Strukturella proteiner etc.
  De MGS Kit genererar slumpmässiga femton baspar in vitro -insättningar i valfritt mål-DNA för:
• Snabb generering av in-frame fem aminosyror infogningsbibliotek av vilket protein som helst för funktionella analyser
• Snabb och slumpmässig mutagenes av klonade promotorer och andra regulatoriska DNA-regioner
• Slumpmässig insättning av ett NotI- restriktionsenzymställe i valfri mål-DNA-klon

• MuA Transposase (F-750):
• MuA-transposas (0,22μ g/μ L, 20μ L)
• 5x reaktionsbuffert

• MuA Transposas koncentrerad (1.1μ g/μ L, 20μ L)
• 5x reaktionsbuffert
• MuA lagringsbuffert

• MuA-transposas (0,22μ g/μ L i MuA-lagringsbuffert)
• Entranceposon (STOP-KanR) (100 ng/μ L i TE-buffert)
• 5x reaktionsbuffert för MuA Transposase
• DMSO 100 %
• Kontrollmål-DNA (370 ng/μ L i TE-buffert)
• MuEnd-2 Primer (25μ M i dd vatten)
• SeqE Primer (10μ M i dd vatten)
• SeqW Primer (10μ M i dd vatten)

• MuA-transposas (0,22μ g/μ L i MuA-lagringsbuffert)
• Entréposon (M1-CamR) (100 ng/μ L i TE-buffert)
• Entréposon (M1-KanR) (100 ng/μ L i TE-buffert)
• 5x reaktionsbuffert för MuA Transposase
• Kontrollmål-DNA (370 ng/μ L i TE-buffert)

Snabb generering av in-frame fem aminosyror infogningsbibliotek av vilket protein som helst för funktionella analyser, snabb och slumpmässig mutagenes av klonade promotorer och andra regulatoriska DNA-regioner, slumpmässigt infogning av ett NotI-restriktionsenzymställe i valfri mål-DNA-klon