Invitrogen™ Thiol Fluorescent Detection Kit

Protein Tiol Detection-satsen som endast används för forskning är en fluorescerande analys designad för kvantifiering och detektering av proteintiol i vanliga biologiska buffertar inklusive biologiska buffertar inklusive tris-, fosfat- och citratbuffertar.

Detta kompletta, bruksfärdiga kit innehåller svarta 96-brunnars plattor, N-acetylcysteinstandard, detektionsreagens, analysbuffert och andra komponenter för att utföra analysen. En 96-brunnars mikroplattläsare som kan läsa av fluorescerande emission vid 510 nm, med excitation vid 390 nm, krävs för användning av detta kit.

Prestandaegenskaper
• Analystyp: fluorescerande detektionskit
• Exempeltyper: vanliga biologiska buffertar inklusive tris-, fosfat- och citratbuffertar
• Känslighet: 4,62 nM
• Standardkurvområde: 78 –10 000 nM
• Reaktivitet: artoberoende

Bakgrund
Fria tioler i biologiska system har viktiga roller. Oxidativt modifierade tiolgrupper av cysteinrester är kända för att modulera aktiviteten hos ett växande antal proteiner. Ett av de mest pressande problemen med detta tillvägagångssätt är att noggrant bestämma graden av modifiering av specifika aminosyror, såsom cysteinrester, i ett komplext proteinprov, speciellt i närvaro av kaotropa medel såsom guandinhydroklorid.

Detta Thiol Fluorescent Detection-kit tillåter användare att exakt bestämma omfattningen av fritt tiolinnehåll i prover med hjälp av ett patentskyddat icke-fluorescerande detektionsreagens, som omvandlas till en ljust fluorescerande produkt vid reaktion med tiolen i provet. Tiolen i provet kan antingen vara en som genereras av en reaktion, såsom slutprodukten av en enzymatisk reaktion såsom glutation, eller kan vara cysteinhalten i proteinet som ska mätas. Denna analys har testats med prover i guanidinhydrokloridkoncentrationer upp till 2M i analysbufferten som medföljer i satsen. Detta gör att tiolinnehållet i oveckade proteiner kan bestämmas exakt. Även om ett cysteinderivat har tillhandahållits som en standard som kan användas för att kvantifiera fria cysteiner på peptider och proteiner, bör analysen kalibreras till en standard som är så nära tiolen som mäts kemiskt som möjligt. Om slutanvändaren till exempel mäter glutation med kitet, ska analysen kalibreras till ett känt, validerat glutationstandardpreparat.

Analysprincip Protein Thiol Fluorescent Detection
Kit är utformat för att kvantitativt mäta tiolgrupper som genereras eller finns i biologiska prover. En standard tillhandahålls för att generera en standardkurva för analysen och alla prover ska läsas av från den genererade kurvan. Prover och standarder pipetteras i en svart mikrotiterplatta. Efter blandning av provet eller standarden med detektionsreagenset och inkubering vid rumstemperatur under en 30-minuters inkubation avläses den fluorescerande produkten vid 510 nm i en fluorescerande plattläsare med excitation vid 390 nm. Eftersom biologiskt genererade fria tioler, såsom glutation och proteintiolgrupper, finns i olika miljöer, bör mängden tiol närvarande eller genererad kalibreras med en lämplig standard.