Thermo Scientific™ Tryptiska matsmältningssatser

Provberedning är ett av de mest varierande och tidskrävande stegen i analysen av proteiner av MS, och kvaliteten och reproducerbarheten av provextraktion och beredning påverkar resultaten avsevärt. Ibland krävs ytterligare steg för att förbättra provkvaliteten, inklusive nedbrytning och återvinning av peptidfragment från SDS-PAGE-geler, eller peptidguanidinering för att förbättra sekvenstäckningen. Varje kit har optimerats för att producera högkvalitativa peptidsmältningar för pålitlig proteomikanalys med hjälp av masspektrometri.

Pierce In-Solution Tryptic Digestion and Guanidination Kit
Pierce In-Solution Tryptic Digestion and Guanidination Kit tillhandahåller en optimerad procedur och reagenser för cirka 90 digestioner, var och en innehåller 0,025 till 10μ g protein.

•Fullständig matsmältning —trypsin smälter helt protein från 0,025 till 10μ g (∼ 90 reaktioner)
•Specifik —guanidineringsreaktion ger liten eller ingen N-terminal modifiering
•Bekvämt —kit innehåller reagenser för nedbrytning, reduktion, alkylering och guanidinering
•Effektivt —protein kan smältas och guanidineras på en enda dag

Trypsin klyver specifikt peptidbindningar på karboxylsidan av arginin- och lysinrester. Signalerna från de arginininnehållande peptiderna är i allmänhet starkare, på grund av den mer grundläggande sidokedjan. För att förbättra den totala joniseringen omvandlar guanidinering lysiner till homoargininer och är specifik för aminen i lysin, men kan förekomma minimalt vid aminen i peptidens N-terminal. Denna derivatisering leder till en ökning av intensiteten hos de lysininnehållande peptiderna och förbättrad sekvenstäckning totalt sett.

Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit
Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit tillhandahåller en komplett uppsättning reagenser för att utföra cirka 150 digestioner på kolloidala Coomassie- eller fluorescerande färgämnesfärgade proteinband. Satsen innehåller modifierat svintrypsin, avfärgningsbuffertar, reduktionsreagenser, alkyleringsreagenser och matsmältningsbuffertar, tillsammans med detaljerade och enkla instruktioner.

•Komplett —innehåller alla nödvändiga reagenser för gelavfärgning, reduktion, alkylering och tryptisk nedbrytning av proteiner
•Robust —optimerad procedur och reagens ger tillförlitlig smältning och datagenerering med ett brett spektrum av förhållanden
•Specifik —innehåller mycket renat och modifierat trypsin av MS-kvalitet utan kymotryptisk aktivitet och minimal autolytisk aktivitet

Två viktiga provberedningssteg är den fullständiga nedbrytningen av proteiner till peptider och efterföljande koncentration och sanering av peptider för masspektrometrianalys. Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit utför det första av dessa steg för proteinprover extraherade från gelskivor. Pierce C-18 Spin Columns and Tips utför det andra steget för att städa upp provet för att vara MS-ready.