Thermo Scientific™ Tryptiska matsmältningssatser

Provberedning är ett av de mest varierande och tidskrävande stegen i analys av proteiner med MS, och kvaliteten och reproducerbarheten av provuttag och förberedelse påverkar resultaten avsevärt. Ibland krävs ytterligare steg för att förbättra provkvaliteten, inklusive nedbrytning och återvinning av peptidfragment från SDS-PAGE-geler, eller peptidguanidinering för att förbättra sekvenstäckningen. Varje kit har optimerats för att producera högkvalitativa peptiddigester för pålitlig proteomisk analys med hjälp av masspektrometri.

Pierce Tryptisk nedbrytning och guanidineringskit i lösningen

Pierce In-Solution Tryptic Digestion and Guanidination Kit tillhandahåller en optimerad procedur och reagenser för cirka 90 nedbrytningar, var och en innehållande 0,025 till 10 μg protein.

• Fullständig nedbrytning—av trypsin bryter helt ner protein som varierar från 0,025 till 10 μg (∼90 reaktioner)
• Specifik—guanidineringsreaktion ger liten eller ingen N-terminal modifiering
• Praktiskt—kit innehåller reagenser för matsmältning, reduktion, alkylering och guanidinering
• Effektivt—protein kan brytas ner och guanidineras på en enda dag

Trypsin klyver specifikt peptidbindningar på karboxylsidan av arginin- och lysinrester. Signalerna från de arginininnehållande peptiderna är generellt starkare, tack vare den mer basiska sidokedjan. För att öka den övergripande joniseringen omvandlar guanidinering lysiner till homoargininer och är specifikt för lysinaminet, men kan ske minimalt vid aminen i peptidens N-terminal. Denna derivatisering leder till en ökning av intensiteten hos de lysininnehållande peptiderna och förbättrad sekvenstäckning totalt sett.

Pierce In-Gel tryptisk matsmältningssats

Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit tillhandahåller en komplett uppsättning reagenser för att utföra cirka 150 nedbrytningar på kolloidala coomassie- eller fluorescerande färgfärgade proteinband. Kitet inkluderar modifierat gristrypsin, avfärgningsbuffertar, reduktionsreagenser, alkyleringsreagenser och matsmältningsbuffertar, tillsammans med detaljerade och enkla instruktioner.

• Complete—inkluderar alla nödvändiga reagenser för gelavfärgning, reduktion, alkylering och tryptisk nedbrytning av proteiner
• Robusta—optimerade procedurer och reagenser ger tillförlitliga nedbrytningar och datagenerering med ett brett spektrum av förhållanden
• Specifikt—innehåller starkt renat och modifierat MS-grad trypsin utan chymotryptisk aktivitet och minimal autolytisk aktivitet

Två viktiga provförberedelsesteg är fullständig nedbrytning av proteiner till peptider samt efterföljande koncentration och sanering av peptider för masspektrometrianalys. Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit utför det första av dessa steg för proteinprover utvunna från gelskivor. Pierce C-18 Spin Columns and Tips utför det andra steget för att rengöra provet så att det är MS-klart.