Applied Biosystems™ ViralSEQ™ Detektionssystem för musminutervirus (MMV).

De Applied Biosystems ViralSEQ Mouse Minute Virus (MMV) Detection Assay är en del av en integrerad DNA-rening och realtids PCR-baserat system för snabb, känslig detektion av MMV från ett brett spektrum av provtyper. Viralt DNA isoleras från ett prov med hjälp av PrepSEQ 1-2-3 Nucleic Acid Extraction Kit (tillgänglig separat). Högkänslig och specifik detektion av virus-DNA utförs sedan med användning av TaqMan PCR-teknik i realtid. Analysen inkluderar en proprietär positiv kontrollmolekyl som eliminerar möjligheten för ett falskt positivt testresultat som uppstår från oavsiktlig kontaminering av testprovet med positiv kontroll.

Hög specificitet och snabb tid till resultat

De ViralSEQ MMV-analysen detekterar de fyra kända stammarna av MMV: i, p, m och c, inklusive sju genomiska sekvenser rapporterade i NCBI-databasen. Tabell 1 visar specificiteten av ViralSEQ MMV-analys och avsaknad av korsreaktivitet med icke-relaterat DNA. Analysarbetsflödet är enkelt och ger resultat på knappt 4 timmar (Figur 1).

Effektiviserad process för övervakning och tidig upptäckt

De ViralSEQ MMV Detection Assay är en del av Cell Culture Rapid Methods-programmet, utformat för att effektivisera detektionen av tre vanliga föroreningar från däggdjurscellodlingsbaserad biofarmaceutisk tillverkning (Figur 2). Programmet sätter nya arbetsflödesstandarder för effektivitet och produktkvalitet, och kombinerar ett provberedningssteg med realtids-PCR-baserade analyser för detektion av mykoplasma, vesivirus och MMV på en instrumentplattform.

Pålitliga resultat

De ViralSEQ MMV-detektionsanalys inkluderar en MMV-diskriminerande positiv/extraktionskontroll, som är en plasmid-DNA som innehåller MMV-DNA-sekvensen som känns igen av MMV-detektionsanalysen (FAM sond). Denna kontroll (Figur 3) utformades för att bete sig som MMV-DNA i både provberedningen och detektionsdelarna av processen. Dessutom konstruerades kontrollen med en extra VIC sondbindningssekvens. Närvaron av båda FAM och VIC signal i en PCR-reaktion kan användas för att skilja ett positivt testresultat mellan MMV (FAM ) och kontroll-DNA (FAM och VIC ). Denna nya kontroll möjliggör riskfri DNA-spikkontrolltestning, vilket eliminerar möjligheten för ett falskt positivt testresultat på grund av oavsiktlig korskontaminering av ett testprov med det positiva kontroll-DNA.

Lågnivådetektering

De ViralSEQ MMV Detection Assay använder beprövade TaqMan teknologi för högkänslighetsdetektion ner till 10 kopior av MMV-genomiskt DNA per PCR-reaktion (virala partiklar motsvarande 0,002 TCID50). Analys av 10-faldiga serieutspädningar av MMV-genomiskt DNA visar analysens breda dynamiska intervall och effektivitet (figur 4 och 5).

Överlägsen provberedningsmetod

PrepSEQ 1-2-3 nukleinsyraextraktionssats (tillgänglig separat, kat.nr. 4452222) hjälper till att möjliggöra konsekvent och hög procentuell återvinning av genomiskt MMV-DNA från komplexa provtyper som inkluderar CHO celler och bovint serum. Figur 6 visar att Ct-värdena för DNA extraherat från ett spikat prov var jämförbara med en ospikad kontroll som amplifierades i realtids-PCR-reaktionen, vilket visar den mycket effektiva DNA-återvinningen med PrepSEQ 1-2-3-kitet.