Applied Biosystems™ ViralSEQ™ Detektionssystem för musminutervirus (MMV).

Hög specificitet och snabb tid till resultat
ViralSEQ MMV-analysen upptäcker de fyra kända stammarna av MMV: i, p, m och c, inklusive sju genomsekvenser rapporterade i NCBI-databasen. Tabell 1 visar specificiteten hos ViralSEQ MMV-analysen och avsaknaden av korsreaktivitet med orelaterat DNA. Analysarbetsflödet är enkelt och ger resultat på knappt 4 timmar (Figur 1).

Strömlinjeformad process för övervakning och tidig upptäckt
ViralSEQ MMV Detection Assay är en del av Cell Culture Rapid Methods Program, utformat för att effektivisera detektionen av tre vanliga föroreningar vid biofarmaceutisk tillverkning baserad på däggdjurscellkulturer (Figur 2). Programmet sätter nya arbetsflödesstandarder för effektivitet och produktkvalitet, och kombinerar ett provförberedelsesteg med realtidsbaserade PCR-analyser för detektion av mykoplasma, vesivirus och MMV på en och samma instrumentplattform.

Tillförlitliga resultat
ViralSEQ MMV Detection Assay inkluderar en MMV Discriminatory Positive/Extraction Control, vilket är ett plasmid-DNA som innehåller MMV-DNA-sekvensen som känns igen av MMV-detektionstestet (FAM proben). Denna kontroll (Figur 3) var utformad för att bete sig som MMV-DNA både i provförberedelsen och detektionsdelen av processen. Dessutom konstruerades kontrollen med en ytterligare VIC probbindningssekvens. Närvaron av både FAM och VIC signal i en PCR-reaktion kan användas för att skilja ett positivt testresultat mellan MMV (FAM) och kontroll-DNA (FAM och VIC). Denna nya kontroll möjliggör riskfri DNA-spike-kontrolltestning, vilket eliminerar möjligheten till falskt positivt testresultat på grund av oavsiktlig korskontaminering av ett testprov med det positiva kontroll-DNA:t.

Lågnivådetektion
ViralSEQ MMV Detection Assay använder beprövad TaqMan teknik för högkänslig detektion ner till 10 kopior av MMV-genomiskt DNA per PCR-reaktion (virala partiklar motsvarande 0,002 TCID50). Analys av 10-faldiga seriella utspädningar av MMV-genomiskt DNA visar på analysens breda dynamiska omfång och effektivitet (Figurer 4 och 5).

Överlägsen provberedningsmetod
PrepSEQ 1-2-3 Nukleinsyraextraktionskit (tillgängligt separat, Cat. No. 4452222) hjälper till att möjliggöra konsekvent och hög procentuell återvinning av MMV-genomiskt DNA från komplexa provtyper som inkluderar CHO celler och bovint serum. Figur 6 visar att CT-värdena för DNA extraherat från ett spikat prov var jämförbara med en ospikad kontroll som förstärktes i realtids-PCR-reaktionen, vilket visar den mycket effektiva DNA-återvinningen med hjälp av PrepSEQ 1-2-3-kitet.