Invitrogen™ Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kit för flödescytometri

De Vybrant FAM kaspasanalyssatser för flödescytometri använder en ny metod för att detektera aktiva kaspaser: kiten dra nytta av FLICA metod, som är en affinitetsmärkning. Denna affinitetsmärkning associerar en fluormetylketondel (FMK), som kan reagera kovalent med ett cystein, med en kaspasspecifik aminosyrasekvens. Olika aminosyraigenkänningssekvenser används för att detektera olika kaspaser: valin-alanin-asparaginsyra (VAD) för polykaspaser (inklusive kaspas-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 och -9), asparaginsyra-glutaminsyra-valin-asparaginsyra (DEVD) för kaspas-3/7, och leucin-sparatreoninsyra-a-treoninsyra-D) för kaspas-8. Ett karboxifluorescein (FAM ) grupp är kopplad som reporter.

De FLICA reagens tros interagera med det enzymatiska reaktiva centret av ett aktiverat kaspas via igenkänningssekvensen och sedan fästa kovalent genom FMK-delen. De FLICA inhibitor är cellgenomsläpplig och icke-cytotoxisk. Obunden FLICA molekyler diffunderar ut ur cellen och tvättas bort; den återstående fluorescerande signalen är ett direkt mått på mängden aktivt kaspas närvarande vid den tidpunkt då inhibitorn tillsattes. De ungefärliga excitations- och emissionstopparna för FLICA propidiumjodid och Hoechst 33342 reagenser är 488 nm/⁄ 530 nm, 535⁄ nm/6617 nm och 350 nm/⁄ 461 nm, respektive. Detektionsreagensen som ingår i individen Vybrant FAM Poly Caspases Assay, Caspase-3 och -7 Assay och Caspase-8 Assay apoptoskit är 488⁄ ⁄530 FAM-VAD-FMK-reagens, 488/⁄ 530 FAM-DEVD-FMK och 488/⁄ 530 FAM-LETD-FMK, respektive.