Invitrogen™ Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit, utan kompetenta celler

Inkluderar Zero Blunt TOPO vektor innehållande ccd B-genen för positiv selektion, som endast tillåter tillväxt av plasmidvektorer med rekombinanter. Resistent mot Kanamycin (KanR) och Zeocin™ (ZeoR).
pCRBlunt II-TOPO vektor: designad för korrekturläsning av
polymeraser pCRBlunt II-TOPO vektorn är designad för att klona trubbiga PCR-produkter som genereras av termostabila korrekturläsande polymeraser som t.ex. Platinum™Pfx DNA-polymeras. pCRBlunt II-TOPO vektor innehåller:

• EcoRI-ställen som flankerar PCR-produktens insättningsställe för enkel excision av inlägg
• Kanamycin och Zeocin resistensgener för ditt val av selektion i E. coli
• SP6-promotor/primerställe för in vitro RNA-transkription och sekvensering
• M13 framåt och bakåt primerställen för sekvensering eller PCR-screening

pCRBlunt II-TOPO klonselektion
pCRBlunt II-TOPO möjliggör direkt selektion av rekombinanter via störning av den dödliga E. coli -genen, ccd B. Vektorn innehåller ccd B-genen fuserad till C-terminalen av LacZα fragment. Ligering av en trubbig PCR-produkt stör uttrycket av LacZα - ccd B-genfusion, som tillåter tillväxt av endast positiva rekombinanter vid transformation. Celler som innehåller icke-rekombinant vektor dödas vid utstrykning. Därför krävs ingen blå/vit screening.
Förenklad TOPO-baserad kloning
med hjälp av TOPO kloningsteknologi, det finns inget behov av PCR-primrar som innehåller specifika sekvenser, post-PCR procedurer, vektorpreparering eller andra tidsintensiva DNA-manipulationssteg. Lägg bara till din PCR-reaktion direkt till den medföljande topoisomerasladdade vektorn, inkubera 5 minuter och transformera E. coli -kompetenta celler.
Effektiv kloning
Med upp till 95 % av klonerna som bär det önskade inlägget kan du screena färre kloner, vilket sparar tid och pengar. pCRBlunt II-TOPO vektor som används i detta kit kommer med dödlig ccd B-gen för effektivt urval av trubbiga PCR-rekombinantprodukter som genereras av termostabila korrekturläsande polymeraser.
Standarden inom kloning
När det gäller kloning, TOPO™ kloningsteknik har varit en pålitlig partner för tusentals forskare i över tio år. Snabb, enkel att använda och effektiv, TOPO™ kloning har tillämpats på många olika vektorer för ett brett spektrum av tillämpningar.
Zero Blunt TOPO Alternativ för PCR
Cloning Kit Zero Blunt TOPO PCR Cloning Kit för direkt införande av trubbiga PCR-produkter i en plasmidvektor kan köpas med en mängd olika kompetenta celler som ger olika fördelar beroende på dina behov Allmän
kloning: TOP10 celler (kat. nr. K2800-20, K2800-40)
Högeffektiv kloning: TOP10 Electrocomp™ Celler (kat. nr. K2860-01, K2860-40)
Allmän kloning, bakteriofag T1-resistens: DH5α -T1R (kat. nr. K2820-20, K2820-40)
Snabb tillväxt: Mach1™ -T1R kemiskt kompetent E. Coli (kat. nr. K2830-20)
Tillhandahåll din egen: för flexibilitet och för att spara pengar (kat.nr. 450254)
En version av satsen som innehåller en PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit (kat. nr. K2800-02) för användning i isolering av ren, sekvenseringsfärdig, rekombinant plasmid finns också tillgänglig.

• Snabbt och enkelt: gå från PCR till kloner i bara tre steg och på så lite som 5 minuters praktisk tid
• Effektiv: få upp till 95 % kloner med korrekt infogning
• Beprövad: pålitlig prestanda i över ett decennium med över 4 000 citeringar
• Enkelt: ingen ligas, post-PCR förfaranden eller PCR-primrar som innehåller specifika sekvenser krävs
• Vektor: pCR ™Blunt II-TOPO vektor: innehåller ccd B-genen, vilket möjliggör direkt selektion av rekombinanter
• Kloningsmetod: TOPO kloning: Topoisomeras –I-baserad, 5-minuters ligering av trubbiga PCR-produkter amplifierade med korrekturläsande termostabila polymeraser
• Kompetenta celler: Olika alternativ: välj från kit med antingen allmänna, högeffektiva, bakteriofag T1-resistenta, snabbväxande kompetenta celler (tillgängliga separat) eller använd dina egna
• Antibiotikaresistens: Ampicillin (AmpR), Kanamycin (KanR)

Kloning, PCR Kloning